免疫磁珠法分離細胞原理

免疫磁珠法分離細胞原理

免疫磁珠法分離細胞原理：
    免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。

免疫磁珠法分為陽性分離法和陰性分離法：
    陽性分離法－磁珠結(jié)合的細胞就是所要分離獲得的細胞
    陰性分離法－磁珠結(jié)合不需要的細胞，游離于磁場的細胞為所需細胞

一般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽性分離法的大，陽性分離法用行更多。

BD™ Imag 磁珠：
· 大小在0.1－0.45mm
· 包被了BD Pharmingen生產(chǎn)的高質(zhì)量單抗
· 磁珠已為白細胞亞群的陽性和陰性分離法所優(yōu)化
· 用于BD™ IMagnet direct magnet 
    將包被了特異性單抗的BD IMag磁珠加入細胞懸液，磁珠特異性地與有相應(yīng)抗原的細胞亞群結(jié)合，通過BD™ IMagnet direct magnet分離得到的連有BD IMag磁珠的細胞可直接用于功能試驗和用流式細胞儀檢測。

缺點：
• 對細胞造成機械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)
• 純度低
• 容易阻塞FCM的噴嘴 

BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分離系統(tǒng)的優(yōu)點，開發(fā)出直徑約200nm中等大小磁珠。
• 技術(shù)簡單，分離在普通的試管中完成
• 易于增大細胞用量
• 對細胞溫和，不影響細胞功能及其分離后培養(yǎng)，可直接上流式
• 純度高，回收率高
• 成本低
    此外，Mouse lineage panel中biotin標記的抗體還可用于FCM分析細胞表面抗原，以及進行細胞/組織免疫熒光實驗。
 

BD提供2種免疫磁珠：
· 包被了針對白細胞亞群的單抗的磁珠
· 包被了鏈霉親和素（streptavidin）的磁珠：此種情況下，在實驗系統(tǒng)中加入生物素標記的單抗，磁珠通過streptavidin與生物素標記的單抗結(jié)合，單抗與細胞表面相應(yīng)抗原特異性結(jié)合而使細胞被磁珠間接捕獲，從而達到分離。這種磁珠使研究者可根據(jù)自己需要選擇生物素標記的各種單抗去分離目的細胞，應(yīng)用范圍更廣泛，使用更靈活。

不同物種磁珠分離試劑
人： CD3, CD4, CD8, CD14, CD19；
小鼠： CD4, CD8a, CD14, CD45R/B220, CD90.2 （Thy1.2）, CD11b, Ly-6G.
ë 利用Streptavidin連接的磁珠，只需選配biotin標記的所需單抗,就能分離更多種類細胞

新貨聚焦：
    現(xiàn)在，BD PMG又推出用于分離小鼠造血干細胞/祖細胞的新試劑mouse lineage panel。
其中包括5種biotin標記單抗，這些單抗能結(jié)合小鼠造血細胞的主要分化系細胞: T、B淋巴細胞，單核/巨噬細胞，粒細胞和紅細胞。將這組試劑與Streptavidin Plus BD™ IMag Particles （557812） 聯(lián)合使用，就能通過免疫磁性分離法去除小鼠骨髓造血細胞的主要分化系細胞，從而富集到造血干細胞和祖細胞（陰性片斷）。

Mouse Lineage Panel（559971）：（5×2ml/vial） 可分離109 Mouse骨髓細胞
1） Biotin-anti-mouse CD3e （CD3 e chain）；
2） Biotin-anti-mouse CD11b；
3） Biotin-anti-mouse CD45R/B220；
4） Biotin-anti-mouse Ly-6G and Ly-6C （Gr-1）；
5） Biotin-anti-mouse TER-119/Erythroid Cells （Ly-76）

磁分離細胞的重要指標是：
    純度和得率，這取決于磁珠所連接單抗的特異性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠會影響細胞活性，也無法直接上流式。
目前市場上有2種磁性細胞分離系統(tǒng)：
* Small particles （≈50 nm） － MACS
* Large particles （1200~4500 nm） －others（如Dynal）
小磁珠 優(yōu)點：
• 對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)
• 可直接上流式檢測，不影響散射光
缺點：
• 需要很強的磁場來分離細胞
• 分離速度很慢，得率不高
• 需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行
• 成本昂貴
大磁珠 
• 技術(shù)簡單，分離可在試管中完成
• 易于增減細胞用量
• 速度快，得率高
• 成本低