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青島能源所開發(fā)出高覆蓋度的單細(xì)胞拉曼分選-測序技術(shù)
2020年06月16日 08:44:40 來源：青島生物能源與過程研究所 點(diǎn)擊量：4026

拉曼激活細(xì)胞分選耦合測序是菌群單細(xì)胞分析的重要手段，但其低基因組覆蓋度一直困擾著業(yè)界。中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所單細(xì)胞中心發(fā)明了全新的單細(xì)胞拉曼分選-測序技術(shù)RAGE-Seq，實(shí)現(xiàn)了菌群中單個目標(biāo)細(xì)胞近100%覆蓋度的精準(zhǔn)測序。該工作發(fā)表于Small。

　　【化工儀器網(wǎng) 科技前沿】拉曼激活細(xì)胞分選耦合測序是菌群單細(xì)胞分析的重要手段，但其低基因組覆蓋度一直困擾著業(yè)界。中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所單細(xì)胞中心發(fā)明了全新的單細(xì)胞拉曼分選-測序技術(shù)RAGE-Seq，實(shí)現(xiàn)了菌群中單個目標(biāo)細(xì)胞近100%覆蓋度的精準(zhǔn)測序。該工作發(fā)表于Small。
 
　　微生物組是地球上能量與元素循環(huán)的主要載體，與人體、動植物以及環(huán)境的健康也息息相關(guān)。因此，微生物組的探測、理解和利用，將跨越“尚難培養(yǎng)微生物屏障”，帶來生命科學(xué)及其應(yīng)用的共性突破。單細(xì)胞拉曼光譜能夠無需培養(yǎng)而快速識別菌群中細(xì)胞的各種代謝功能(Biotechnol Adv, 2019)，但是一直以來，針對菌群的單細(xì)胞拉曼分選和測序都面臨著兩個瓶頸：首先，如何無損快速地獲取特定拉曼表型的單個細(xì)胞；其次，如何高覆蓋度地獲得精確到一個細(xì)胞的基因組。
 
　　針對上述問題，青島能源所單細(xì)胞中心徐騰、公衍海、蘇曉璐等發(fā)明了一種在液相環(huán)境中測量與分選菌群中目標(biāo)微生物單細(xì)胞的拉曼分選-測序耦合技術(shù)RAGE-Seq(Raman-activated Gravity-driven Encapsulation and Sequencing；圖1)。它通過聯(lián)用光鑷及微流控液滴技術(shù)，將特定拉曼表型的細(xì)菌單細(xì)胞從群體中精準(zhǔn)分離，并包裹到皮升級液滴中，然后采用宏觀移液的方式便可將包裹有目標(biāo)細(xì)胞的液滴導(dǎo)出轉(zhuǎn)移到試管中，從而快速、精確、簡便地實(shí)現(xiàn)“單個細(xì)胞-單個液滴-單個試管”的拉曼分選流程，可直接耦合下游細(xì)胞培養(yǎng)或基因組分析。
 
　　由于目標(biāo)細(xì)胞在分選過程中始終包裹于水相環(huán)境中，RAGE-Seq有效降低了拉曼分選中激光引入的細(xì)胞損傷。其導(dǎo)出的單細(xì)胞液滴體系，經(jīng)過簡單震蕩后可轉(zhuǎn)變成乳化擴(kuò)增體系，大幅度降低了傳統(tǒng)單細(xì)胞基因擴(kuò)增(如單細(xì)胞MDA)中存在的偏好性，從而可從一個細(xì)胞得到近乎完整的全基因組信息。此外，其獨(dú)特的單液滴分選轉(zhuǎn)移形式，有效解決了單細(xì)胞分析中常見的污染問題。
 
　　基于單細(xì)胞中心前期發(fā)明的重水孵育單細(xì)胞拉曼藥敏快檢技術(shù)(Anal Chem, 2017)，研究人員用RAGE-Seq從臨床尿液樣本中直接識別和分選出耐受特定抗生素的臨床大腸桿菌，并進(jìn)行了精確到一個細(xì)胞的全基因組測序，覆蓋度可達(dá)99.5%。這一高覆蓋度保證了基因組上所有耐藥基因突變均得以全面、精確地揭示。
 
　　從菌群中直接、精準(zhǔn)地獲取一個細(xì)菌細(xì)胞的藥敏性表型及其完整基因組，以往還未有先例。因此，RAGE-Seq的這一獨(dú)特能力，預(yù)計將帶來臨床感染診斷和用藥、耐藥性傳播監(jiān)控與機(jī)制、海洋生態(tài)監(jiān)控與資源挖掘等領(lǐng)域的一系列突破。
 
　　基于RAGE-Seq，單細(xì)胞中心推出了臨床單細(xì)胞拉曼藥敏快檢儀CAST-R，以及和現(xiàn)有熒光/明場顯微鏡耦合的模塊式單細(xì)胞微液滴分離系統(tǒng)EasySort。這些原創(chuàng)的系列儀器正在服務(wù)各種場景下的單細(xì)胞功能分選與測序(圖1)。
 
　　該工作由單細(xì)胞中心馬波和徐健主持完成。該工作得到中科院戰(zhàn)略性先導(dǎo)專項、國家自然科學(xué)基金委、山東省自然科學(xué)基金委的資助。
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