NCI-H292人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞

NCI-H292人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞

NCI-H292人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞是肺癌研究領(lǐng)域中針對肺粘液上皮樣癌（MEC）的核心實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，源自人肺粘液上皮樣癌組織（罕見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，占肺惡性腫瘤的 1%-2%，好發(fā)于中央氣道），經(jīng)體外分離、純化及長期傳代馴化建立。該細(xì)胞完整保留肺粘液上皮樣癌 “粘液分泌功能活躍、上皮分化特征明顯、惡性度中等” 的核心病理屬性，傳代 40 代以內(nèi)仍穩(wěn)定維持粘液合成相關(guān)分子表型，成為研究肺粘液上皮樣癌發(fā)病機(jī)制、粘液分泌調(diào)控、抗腫瘤藥物篩選及治療敏感性評估的關(guān)鍵載體，為這一少見肺癌亞型的科研突破與臨床治療方案優(yōu)化提供重要支撐。

一、核心生物學(xué)特性

（一）組織來源與細(xì)胞屬性

NCI-H292 細(xì)胞源自臨床肺粘液上皮樣癌患者的中央氣道腫瘤組織，與體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的遺傳背景、病理形態(tài)高度一致。其核心優(yōu)勢體現(xiàn)在三方面：一是功能特異性突出，可持續(xù)合成并分泌酸性粘多糖類粘液（如粘蛋白 MUC5AC、MUC2），精準(zhǔn)模擬體內(nèi)腫瘤的粘液分泌特性，*肺粘液分泌型腫瘤模型的研究空白；二是分子特征明確，高表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物與粘液合成相關(guān)基因，且存在 CRTC1-MAML2 融合基因（肺粘液上皮樣癌高頻分子特征，約占 60%-70%），與臨床患者分子譜匹配，適合機(jī)制研究；三是培養(yǎng)穩(wěn)定性強(qiáng)，體外以貼壁生長為主，增殖速率可控，無需復(fù)雜誘導(dǎo)劑即可維持粘液分泌功能，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá) 90% 以上，滿足大規(guī)模研究需求。

（二）形態(tài)與生長特征

體外培養(yǎng)時，NCI-H292 細(xì)胞呈現(xiàn)典型肺粘液上皮樣癌細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞呈多邊形或柱狀，排列緊密且具上皮樣極性（模擬氣道上皮細(xì)胞排列模式），胞質(zhì)豐富且含大量嗜堿性粘液顆粒（光學(xué)顯微鏡下呈深藍(lán)色點(diǎn)狀或團(tuán)塊狀聚集，PAS 染色呈陽性，是粘液分泌細(xì)胞的關(guān)鍵形態(tài)標(biāo)志）；細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，核質(zhì)比中等，核仁清晰（1-2 個），染色質(zhì)分布均勻，核分裂象中等（倍增時間約 60-72 小時，與肺粘液上皮樣癌增殖特性一致），體現(xiàn)中等惡性增殖特性。

細(xì)胞生長無明顯接觸抑制，匯合度達(dá) 90% 后可形成局部 “鋪路石樣” 單層結(jié)構(gòu)，部分區(qū)域因粘液堆積呈現(xiàn)透明狀；常規(guī)接種密度以 3×10?-5×10? cells/cm2 為宜，接種后 24-36 小時開始貼壁，48 小時貼壁率超 90%，72-96 小時進(jìn)入對數(shù)生長期，144 小時左右匯合度達(dá) 85%-90%，需及時傳代避免過度密集導(dǎo)致粘液過度堆積（影響細(xì)胞活性與營養(yǎng)吸收）。

（三）分子表型與功能特性

分子層面，NCI-H292 細(xì)胞呈現(xiàn)肺粘液上皮樣癌特異性表型：一是高表達(dá)上皮與粘液相關(guān)標(biāo)志物，如細(xì)胞角蛋白 18（CK18，陽性率≥90%，上皮細(xì)胞標(biāo)志）、粘蛋白 MUC5AC（陽性率≥85%，氣道粘液主要成分）、上皮細(xì)胞膜抗原（EMA，陽性率≥80%），可通過免疫熒光、Western blot 精準(zhǔn)鑒定細(xì)胞身份；二是粘液合成相關(guān)分子異?；钴S，高表達(dá)粘蛋白合成調(diào)控因子（如 FOXA2、KLF4）與粘液分泌相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如 MUC1），為持續(xù)粘液分泌提供分子基礎(chǔ)；三是存在典型分子特征，穩(wěn)定攜帶 CRTC1-MAML2 融合基因（通過 RT-PCR 可穩(wěn)定檢測到融合轉(zhuǎn)錄本），該融合基因可驅(qū)動細(xì)胞異常增殖與粘液分泌，是肺粘液上皮樣癌的核心致病因素。

功能上，該細(xì)胞具備兩大核心特性：一是高效粘液分泌功能，分泌的粘液以酸性粘多糖為主，可通過 ELISA 檢測粘液蛋白含量（約 15-25μg/10?cells/24h），或通過阿爾辛藍(lán)染色直觀觀察粘液顆粒，模擬臨床患者腫瘤組織 “粘液湖” 形成的病理特征；二是惡性增殖與侵襲能力，體外 Transwell 實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞穿過基質(zhì)膠的侵襲率達(dá) 30%-45%，軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)中克隆形成率達(dá) 25%-35%，體現(xiàn)其惡性轉(zhuǎn)化特性，且粘液分泌量與侵襲能力呈正相關(guān)（粘液可增強(qiáng)細(xì)胞對基質(zhì)的黏附與降解能力）。

二、體外培養(yǎng)與操作規(guī)范

（一）基礎(chǔ)培養(yǎng)體系配置

NCI-H292 細(xì)胞對培養(yǎng)條件要求中等，需針對性配置培養(yǎng)基以維持粘液分泌功能與惡性特征：

（二）傳代與功能維持操作

傳代時機(jī)：當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá) 85%-90% 或粘液堆積厚度超 5μm 時需及時傳代（通常每 5-6 天一次），避免過度密集導(dǎo)致細(xì)胞脫落與粘液分泌功能異常（表現(xiàn)為 MUC5AC 表達(dá)下降）。傳代比例按 1:3-1:5 稀釋，固定比例（如 1:4）可確保粘液分泌表型穩(wěn)定傳遞。

傳代步驟：

功能維持要點(diǎn)：長期傳代易導(dǎo)致粘液分泌功能下降與 CRTC1-MAML2 融合基因表達(dá)不穩(wěn)定，需每 8 代檢測一次 MUC5AC 表達(dá)（陽性率需≥80%）、粘液分泌量（確保≥12μg/10?cells/24h）及融合基因轉(zhuǎn)錄本（通過 RT-PCR 驗(yàn)證）；若功能下降，可在培養(yǎng)基中添加 5ng/mL TGF-β 培養(yǎng) 48 小時，促進(jìn)粘液合成相關(guān)基因表達(dá)；避免頻繁更換血清批次，每次更換后需適應(yīng)培養(yǎng) 2-3 代，待細(xì)胞增殖與粘液分泌功能穩(wěn)定后再用于實(shí)驗(yàn)。

（三）凍存與復(fù)蘇要點(diǎn)

凍存準(zhǔn)備：選擇對數(shù)生長期、粘液分泌正常的細(xì)胞（活力≥90%，MUC5AC 陽性率≥85%），凍存液按 “10% DMSO+20% 胎牛血清 + 70% RPMI-1640 培養(yǎng)基” 配制，全程在冰浴中操作，DMSO 緩慢滴加并輕柔混勻，防止溫度驟降導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)冰損傷與粘液顆粒破裂。

凍存流程：將細(xì)胞消化為單細(xì)胞懸液后離心（1000×g，5 分鐘），棄上清；用預(yù)冷凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整濃度為 8×10?-1×10? cells/mL（因粘液分泌細(xì)胞復(fù)蘇存活率稍低，凍存濃度需高于普通腫瘤細(xì)胞），分裝至凍存管；采用程序降溫法：4℃放置 30 分鐘→-20℃放置 1 小時→-80℃放置 12 小時→轉(zhuǎn)入液氮長期保存，不可直接放入 - 80℃（易導(dǎo)致粘液顆粒聚團(tuán)結(jié)冰，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)）。

復(fù)蘇操作：從液氮取出凍存管后，立即放入 37℃水浴快速解凍（60-90 秒內(nèi)wan全融化）；將細(xì)胞懸液緩慢加入 10 倍體積預(yù)熱的含血清培養(yǎng)基，輕輕混勻后離心（1000×g，5 分鐘）去除 DMSO；用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種至培養(yǎng)瓶，培養(yǎng) 24 小時后更換培養(yǎng)基，去除死細(xì)胞與殘留 DMSO；復(fù)蘇后 48 小時細(xì)胞活力可恢復(fù)至 85% 以上，72 小時后需檢測 MUC5AC 表達(dá)與粘液分泌量，確保功能無顯著損傷，一周后可正常開展實(shí)驗(yàn)。

三、主要研究應(yīng)用場景

（一）肺粘液上皮樣癌機(jī)制研究

NCI-H292 細(xì)胞是解析肺粘液上皮樣癌惡性進(jìn)展與粘液分泌機(jī)制的核心工具：

（二）抗腫瘤與抗粘液藥物篩選

依托其粘液分泌特性，NCI-H292 細(xì)胞廣泛用于肺粘液上皮樣癌藥物研發(fā)：

（三）粘液相關(guān)耐藥與微環(huán)境研究

肺粘液上皮樣癌的粘液層易導(dǎo)致治療耐藥，NCI-H292 細(xì)胞是理想研究模型：