36602ES60 TMB One Solution (HRP-based ELISA)
參考價 | ¥285.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號36602ES60
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2024/5/9 9:29:21
- 訪問次數(shù) 1269
100ml | 285.00元 | 999 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品描述
TMB,即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine,中文全稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺,是辣根過氧化物酶(HRP)的常用顯色底物之一。在HRP的催化下,TMB被過氧化氫(H2O2)氧化生成藍色產(chǎn)物。主要吸收峰在370nm和652nm。在加入硫酸或者磷酸終止上述反應(yīng)后,產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,最大吸收峰為450 m。傳統(tǒng)的TMB顯色試劑通常以AB液形式提供(TMB和H2O2溶液分到兩管,僅在使用前才可混合使用),并且容易產(chǎn)生沉淀,使用起來相對不方便,且容易導(dǎo)致操作誤差。為克服以上缺點,我司采用新的TMB顯色技術(shù),將所有相關(guān)試劑全部混合配成單一溶液。具有以下優(yōu)點:
1)即開即用,操作簡單,使用前無需做AB液混合的準備;檢測靈敏度不低于AB液體系;
2)僅由單一溶液組成,簡化了操作步驟,也降低了操作誤差,結(jié)果更加穩(wěn)定;
3)含有 的穩(wěn)定劑,保證溶液4℃下長期保存;
4)相比于其他HRP酶顯色底物(如ABTS和OPD)相比,檢測靈敏度更高,而且本TMB溶液不含有DMF或DMSO等有機溶劑,安全無毒;
5)另外,TMB溶液可分為沉淀可溶型和沉淀不可溶型,前者適用于ELISA及其他通過液體反應(yīng)檢測HRP的應(yīng)用,后者適用于WB或其他通過沉淀反應(yīng)檢測HRP的應(yīng)用。
本品為單一溶液形式且沉淀可溶型的TMB顯色液,適用于ELISA檢測,操作時只需加入200μl即用型的顯色液,做簡單孵育,加入2M H2SO4終止反應(yīng)后,即可用分光光度計在450nm處測定吸光度。本品可供完成約500個樣品的檢測。另外,本品也可用于血液或血紅蛋白等樣品中過氧化物酶量的檢測。
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃避光保存,一年有效。
注意事項
1)TMB對人體有刺激性,請注意適當(dāng)防護。
2)正常情況,本顯色液呈現(xiàn)無色或者淡藍色(OD650nm<0.04)。若是出現(xiàn)渾濁,或者顏色明顯很藍,應(yīng)停止使用。
3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4)本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法
1) 使用之前,取出適量單組份TMB顯色液,使其回到室溫再開始使用;
2) 對于ELISA檢測:參考ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟,當(dāng)加入HRP標記的抗體并孵育一段時間后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次,每次3-5min。洗滌完畢后,去除洗滌液,加入200μl TMB顯色液。
對于在96孔板內(nèi)進行的其他適當(dāng)檢測(如檢測組織或細胞樣品內(nèi)源性過氧化物水平):直接在96孔板內(nèi)加入10-20μl 樣品,之后加入200μl TMB顯色液;
3) 室溫避光孵育3-30min或更長時間(可長達24h),直至顯色至預(yù)期深淺(此時反應(yīng)液為藍色)。
4) 加入50μl 2M H2SO4終止反應(yīng),溶液由藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,隨后在450nm測定吸光度。或直接在370nm或652nm測定吸光度。
常見問題
1. 背景顯色太深
1)如果背景(沒有樣品的對照)顯色太深,一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉,如商業(yè)化的封閉液或者商業(yè)化的和一抗相同來源的血清(5-10%)進行封閉。另一方面,直接使用經(jīng)過適當(dāng)親和吸附的二抗,以減小二抗的非特異性交叉吸附。
2)可以考慮縮短顯色時間,或降低二抗?jié)舛?。另外,選擇適當(dāng)強度的洗滌液,或延長洗滌時間也會有所幫助。
3)可考慮TMB底物本身反應(yīng)過于強烈。為了避免沉淀的產(chǎn)生,可在終止反應(yīng)后馬上讀數(shù),或者進一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物。
2. 沒有顯色或顯色太弱
1)適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果,滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi),檢測二抗是否被正常顯色。
2)可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系,例如使用 素檢測體系。
3)可以適當(dāng)延長顯色時間。
4)如果上述改進不能獲得預(yù)期效果,可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。
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