AAA-Direct 氨基酸直接分析儀

AAA-DirectTM氨基酸分析系統(tǒng) 分析氨基酸zui直接的方法
戴安公司AAA-Direct氨基酸分析儀掀起了氨基酸分析*的一次重大革新，與現(xiàn)存的方法不同，氨基酸不需要任何柱前柱后衍生，通過積分脈沖安培檢測器（IPAD）被直接檢測，而且具有相當(dāng)高的靈敏度，該系統(tǒng)采用了戴安公司為氨基酸的高分辨分離專門設(shè)計的的2mm直徑的微孔陰離子交換柱Dionex　AminoPacTMPA10.
直接檢測技術(shù)的簡便性，使其能廣泛運用于蛋白的鑒定和食品分析，另外，AAA-Direct系統(tǒng)具有*的優(yōu)點，可以用于在線的控制和過程的優(yōu)化，如：大規(guī)模的細胞培養(yǎng)液和發(fā)酵液.
檢測方法
通過IPAD直接檢測一級和二級氨基酸.不需要柱前或柱后衍生.
采用適用于氨基酸分析的AAA-Certified金電極.
分離方法
氨基酸和氨基糖高分辨分離.
陰離子交換分離*消除了基體影響.
一次進樣氨基酸和碳水化合物同時出峰.
性能
高靈敏度-檢出限可達pmol, 至少比茚三酮方法高出50倍.
對于大部分氨基酸, 檢測器響應(yīng)的線性超過三個數(shù)量級
可靠的定量分析-所測數(shù)據(jù)與陽離子交換/茚三酮氨基酸分析方法所測的數(shù)據(jù)*吻合.
可以直接了當(dāng)?shù)貦z測尚很難檢測的氨基酸,如:色氨酸,半胱氨酸,胱氨酸,蛋氨酸和磷酸氨基酸.
對于如膠原蛋白之類的復(fù)雜蛋白樣品來說,是一種更快速、更便捷的方法.
樣品前處理簡單.
可以適用于任何常用的水解過程,如6M HCI, 4M甲基磺酸(MSA),過甲酸氧化/6M HCI,以及4.2M NaOH.
系統(tǒng)配置
高效四元梯度微孔泵和自動脫氣系統(tǒng)提供精確的流路和組分控制,淋洗液消耗量低
整個系統(tǒng)的零部件及流路由惰性的,無金屬的PEEK材料組成,可以耐腐蝕性的淋洗液和緩沖液
柱溫箱內(nèi)可以放置兩根柱子,檢測池和進樣閥.
選配的樣品準(zhǔn)備裝置使得某些操作自動化,如:準(zhǔn)備多點校正標(biāo)樣時的單一或系列稀釋,標(biāo)準(zhǔn)曲線自動產(chǎn)生.
經(jīng)濟而且操作方便
AAA-Direct氨基酸分析儀選用2mm微孔系統(tǒng),淋洗液消耗量低,這樣使操作更便利,更節(jié)約時間.IPAD的直接檢測,免除了費時的樣品衍生過程及昂貴的試劑消耗.在AAA-Direet系統(tǒng)中,不再需要麻煩的柱后衍生泵系統(tǒng)和很貴的試劑,樣品只需稀釋和過濾,圖1所示為100pmol標(biāo)樣的典型譜圖.
*保留時間和檢測響應(yīng)值
對氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液及諸如細胞培養(yǎng)液,發(fā)酵液和蛋白水解液等實際樣品的分析已證明了,該系統(tǒng)具有優(yōu)異的檢測器響應(yīng)和保留時間穩(wěn)定性.圖2所示是氨基酸標(biāo)準(zhǔn)混合液連續(xù)進樣100次以上檢測器響應(yīng)值.圖3和圖4分別為細胞培養(yǎng)液介質(zhì)進樣100次以上保留時間和檢測器響應(yīng)的重現(xiàn)性.
穩(wěn)定可靠的分析柱技術(shù)
AminoPac PA10微孔柱是專門用于氨基酸分離的選擇性高效陰離子交換柱.與以往的離子交換柱相比,這種柱子有很多優(yōu)點:
梯度淋洗后快速再平衡.
優(yōu)異的傳質(zhì)特征,分離效果好.
耐酸堿(PH范圍:0-14)
機械穩(wěn)定性(4000psi)和化學(xué)穩(wěn)定性高,延長柱子壽命.
復(fù)雜基質(zhì)進樣后,可以用常規(guī)有機溶劑快速清洗
常用的梯度程序
圖5所示為分離22種常見氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)三元梯度.(水,0..25M氫氧化鈉,1.0M醋酸鈉).如果有特殊應(yīng)用,梯度程序可以自由設(shè)定.
適用于所有標(biāo)準(zhǔn)水解過程
四種常用的水解過程,如6M HCI, 4M MSA,過甲酸氧化/6M HCI和4.2M NaOH,都適用于AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng).另外,由于色譜保留機理是離子交換,AminoPac PA10對中性樣品組分沒有保留,這樣就*消除了基體的影響.
簡化色氨酸測定
色氨酸在常用的HCI水解過程中會分解,影響測定結(jié)果.而NaOH水解過程在柱前、柱后衍生分析方法中又比較麻煩,因為水解產(chǎn)物必須經(jīng)中和、稀釋。.因此在陽離子交換/茚三酮方法中勢必會消耗大量樣品.另外,在衍生過程中產(chǎn)生的大量NaC1干擾,也是個問題.在AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng)中，因為用NaOH作為淋洗液，色氨酸經(jīng)NaOH后可直接進樣分析。樣品的準(zhǔn)備非常簡單，不需中和反應(yīng)。進樣前只需進行水解產(chǎn)物的稀釋和過濾
同時測定氨基酸，氨基糖和碳水化合物
蛋白水解物中通常存在氨基糖。AminoPac PA10對氨基糖亦有很好的響應(yīng)，因此在測定氨基酸的同時可測定氨基糖（見圖6）。
生化工業(yè)中，AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng)已經(jīng)以實驗和在線方式被用于發(fā)酵池和大規(guī)模細胞培養(yǎng)液中氨基酸和氨基糖的直接監(jiān)控.這就為蛋白和肽治療過程中氨基酸和碳水營養(yǎng)物的監(jiān)控提供了更簡便的方法.
圖7所示為細胞培養(yǎng)液的分析結(jié)果.插圖為分析中所用IPAD的波形,圖中藍線為積分階段.采用此波形,能同時測定樣品中常見的氨基糖和氨基酸.如果積分階段移向更低的電壓,羥氨基酸的影響被抑制.同一樣品中的碳水化合物和羥基氨基酸能被選擇性地檢測.
圖8所示是大腸桿菌發(fā)酵液隨時間變化的一系列譜圖的疊加.各種氨基酸隨時間的變化一目了然.這對生產(chǎn)過程的*化非常有利，因為基本氨基酸的量可以根據(jù)需要簡便地控制和調(diào)整.
蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物
運用AAA-Direct氨基酸分析系統(tǒng),已經(jīng)成功地分析了包括膠原蛋白在內(nèi)的各種蛋白質(zhì)和肽水解產(chǎn)物.檢驗數(shù)據(jù)與柱后茚三酮分析法的結(jié)果**.圖9所示為膠原蛋白水解物的色譜圖.尤其值得一提的是,所有氨基酸的定量只需一次進樣.
食品和飲料分析
該系統(tǒng)已經(jīng)用于多種食品和飲料樣品的分析.包括未加工和加工過的肉類水解物,果汁和蔬菜汁,啤酒和紅酒.圖10所示為多種不同的未加工肉類經(jīng)過MSA水解后的分析譜圖.圖11所示為紅酒中的游離氨基酸測定結(jié)果.樣品前處理非常簡單,因為IPAD的靈敏度非常高,允許樣品稀釋1000倍,甚至更高.
訂貨指南
氨基酸直接分析儀有四種不同的系統(tǒng)配置，適用于不同的氨基酸分析。系統(tǒng)1是基本配置；系統(tǒng)2包括了樣品配置器，可自動配置（多種水平）校正標(biāo)準(zhǔn)；系統(tǒng)3和系統(tǒng)4則另外包括了樣品冷卻裝置
標(biāo)準(zhǔn)配置
每臺AAA-Direct系統(tǒng)包括：
帶有真空脫氣的微孔PEEK GP50泵 P/N 054045
ED40檢測器（包括PH參比電極） P/N044094
微孔管道配件箱 P/N052324
淋洗液組織器：1個調(diào)節(jié)器
4個2L塑料瓶 P/N 054468
系統(tǒng)1
帶有AS50自動進樣器和加熱室的AAA-Direct分析儀
除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外，還包括AS50全自動選擇PEEK自動進樣器和加熱室；用于AS50的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統(tǒng)2
帶有AS50自動進樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇的AAA-Direct分析儀
除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外，還包括AS50全自動選擇PEEK自動進樣器、加熱室和帶有樣品配置選擇，用于AS50的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統(tǒng)3
帶有LC25和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀
除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外，還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500；LC25色譜柱箱；用于LC25的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

系統(tǒng)4
帶有LC30和帶有樣品冷卻選擇器的AS3500的AAA-Direct分析儀
除上述的標(biāo)準(zhǔn)配置外，還包括帶有樣品冷卻選擇器的AS3500；LC30色譜柱箱；用于LC30的氨基酸金電極安培池；1.5ml瓶定孔轉(zhuǎn)盤自動選擇器和1包1.5ml帶有隔墊的玻璃小瓶(100個/包)

用AAA-Direct直接分析系統(tǒng)進行氨基酸確定，必須配備金電極電化學(xué)池，PeakNet工作站、AminoPac PA10分析柱及保護柱均需另外訂貨。

附加部件
AminoPac PA10分析柱 （2X250mm） P/N55406
AminoPac PA10保護柱 （2X50mm） P/N55407
用于AS50的氨基酸金電極安培池 P/N55826
用于LC25的氨基酸金電極安培池 P/N55827
用于LC30的氨基酸金電極安培池 P/N55828
氨基酸金工作電極 P/N55832
DX-LAN泵卡 P/N044195
檢測卡 P/N044196
PeakNet控制WindowsNT工作站 P/N054464

技術(shù)指標(biāo)
柱子
尺寸：
AminoPac PA10分析柱： 2X250mm
AminoPac PA10保護柱： 2X50mm
zui大工作壓力：4000Psi
流動相兼容性：pH 0-14；0-* HPLC溶劑
樹脂粒子參數(shù)
基球直徑：8.5um
微孔尺寸：〈 10Å
交聯(lián)度：（ %DVB ）：〈55%
膠乳參數(shù)
官能團：烷基季胺鹽離子
膠乳交聯(lián)度：1%
膠乳尺寸：80nm
疏水性：疏水
重量：60 微克當(dāng)量（分離柱）
12 微克當(dāng)量（保護柱）
柱結(jié)構(gòu)：PEEK材料
所有部件由非金屬組成
GP50 技術(shù)指標(biāo) AS50自動進樣器技術(shù)指標(biāo)
適用性：梯度和等度分離構(gòu)造：化學(xué)惰性，無金屬污染的peek材料；泵頭和流路適用于pH值為0-14的淋洗液和反相淋洗液。類型：雙重往復(fù)式柱塞微處理器控制連續(xù)沖程，可變流速控制方式：手動或通過繼電器遙控TTL或PeakNet軟件泵頭體積：25µL死體積（無混合器）：〈300µLzui大承受壓力：35MPa(5000psi)壓力報警限值：超出上限35 MPa(5000psi)一個單位；低于設(shè)定下限一個單位；流速準(zhǔn)確度：設(shè)定值的±0.5%或0.2µL/min流速精密度：小于0.2%流速范圍：0.01-2.50mL/min淋洗液選擇：四種不同的流動相成分，任何一種所占比例為0-*比例準(zhǔn)確度：±2%壓力波動：系統(tǒng)壓力的2.0%（系統(tǒng)有壓力狀態(tài)下） 樣品容量：49×10mL; 100×1.5mL樣品瓶大小：10mL和1.5mL帶裁切好瓶墊的樣品瓶每個樣品瓶可進樣次數(shù)：1-99次zui小進樣體積：在100µL微型進樣瓶中可從5µL樣品中采集1µL，在300µL微型進樣瓶中可采集10µL，在10mL微型進樣瓶中可從500µL樣品中采集20µL可變的體積范圍：1-100µL有0.1µL的增加，100-1000µL有1µL的增加注射閥：帶Tefzel轉(zhuǎn)子封口的Peek Rheodyne 閥進樣環(huán)體積：標(biāo)準(zhǔn)的25µL進樣環(huán)及其它大小的進樣環(huán)進樣精度：固定式的樣品環(huán)，進樣量為20µL 時〈0.3%的偏差，變化式的樣品環(huán)，〉0.5%的偏差稀釋精密度：1:100稀釋時為1.0%的偏差配置精密度：重量法，〈0.2%的偏差轉(zhuǎn)移法，500µL的沖洗體積時誤差〈0.01%環(huán)境溫度范圍：10-40℃濕度范圍：10-90%相對濕度，無冷凝電壓：90-265V, 47-63和Hz 功率：可在300-600瓦間選擇尺寸大?。?4×30×46cm(26×12×19inch)重量：〈30kg (〈65lb)加熱箱和色譜箱技術(shù)指標(biāo)大小：50×17.5×40cm(20×7×16inch)重量：色譜箱：9kg(20lb)加熱箱：18kg(40lb)加熱箱溫度控制范圍：10-40℃，偏差為±0.2℃環(huán)境操作溫度：20-40℃溫度穩(wěn)定性：±0.2℃溫度準(zhǔn)確度：±0.1℃加熱和冷卻速率：環(huán)境溫度為20℃時，在5min內(nèi)可從20℃升至40℃在10min內(nèi)可從40℃降至20℃死體積：zui小值〈100µL安全性：漏液傳感器和足夠的漏液處理能力，液體溢出閥樣品預(yù)備項技術(shù)指標(biāo)稀釋精度：1:100稀釋時，面積偏差小于1.0%（包括稀釋和進樣）配置準(zhǔn)確度：重量法為0.2%