嗜酸性粒細胞過氧化物酶(EPX)真核蛋白

樣品要求：

1、待標記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請?zhí)崆皹俗⒄f明。

2、待標記樣品最小標記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

產(chǎn)品名稱：嗜酸性粒細胞過氧化物酶(EPX)真核蛋白

 英文名稱：Eukaryotic Eosinophil Peroxidase (EPX)

EPO; EPP; EPX-PEN; EPER

酶與激酶

相關(guān)產(chǎn)品：

Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein 0.5mgMeasles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein) 麻疹病毒紅血球凝集素蛋白多肽

B3GALTL Protein Human 重組人 B3GALTL 蛋白 (His 標簽)

TNFRSF10D重組食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10

特性

重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意,這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

(1)原核細胞表達的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。

(2)真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工,這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

白喉棒桿菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Corynebacterium diphtheriaePCR 50T

貝巴魯病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Bebaru Virus(BEBV)RTPCR 50T

丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Hepatitis C Virus(HCV)RTPCR 50T

布氏岡比亞錐蟲 英文名稱; Trypanosoma brucei gambiense 50T

MCP-4/CCL13(Human monocyte chemotactic protein 4) ELISA kit 人單核細胞趨化蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

fMet(Human formylmine) ELISA Kit 人甲酰甲硫酸 96T

SLITRK4 英文名稱： 神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK4抗體 0.2ml

Collagen II 英文名稱： Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體 0.1ml

Anti-FSH 促卵泡刺激素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

嗜酸性粒細胞過氧化物酶(EPX)真核蛋白產(chǎn)色葡萄球菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Staphylococcus chromogenesPCR

產(chǎn)氣克雷伯氏菌PCR檢測試劑盒 英文名稱; Klebsiella aerogenesPCR

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium perfringens types AAPCR

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒 英文名稱; Clostridium perfringensPCR

蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。