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大鼠心臟免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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免疫組化

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伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長江軟件園。2024年1月與上海大學(xué)醫(yī)學(xué)院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ),專注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動物實(shí)驗(yàn)等學(xué)科的研究服務(wù)體系,為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。


目前已建成并投入使用的實(shí)驗(yàn)室面積近2800平方米,包含基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)平臺、組學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺以及動物實(shí)驗(yàn)平臺,基本能夠滿足科研課題研究的全流程。


伊萊博生物擁有專業(yè)的技術(shù)支持和實(shí)驗(yàn)操作人員團(tuán)隊(duì),核心成員來自中科院、復(fù)旦、交大、同濟(jì)等國內(nèi)重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu),能夠提供前沿的、完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)咨詢與服務(wù)。


為了響應(yīng)國家大力發(fā)展基礎(chǔ)研究的號召,推動實(shí)驗(yàn)科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步,伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢,為廣大科研工作者提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)服務(wù),從理論和實(shí)操兩個部分,培養(yǎng)其科研思維以及解決問題的能力,為今后的科研工作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。








免疫學(xué);ELISA試劑盒,抗體,生化試劑,相關(guān)試劑。原代細(xì)胞,傳代細(xì)胞,及培養(yǎng)試劑

應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

  1. ?樣本處理?

    • 需取大鼠心臟組織,去除周圍血管和結(jié)締組織,經(jīng)4%多聚甲醛固定后石蠟包埋或OCT包埋冷凍切片58

    • 新生大鼠心臟需用D-Hanks液沖洗殘留血細(xì)胞,組織塊消化采用0.08%蛋白酶分次消化4

  2. ?主要試劑與儀器?

    • 一抗(如心鈉素抗體、Col Ⅰ/Ⅲ抗體)、二抗、DAB顯色試劑

    • 需準(zhǔn)備CO?培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、離心機(jī)等設(shè)備


二、實(shí)驗(yàn)操作流程

  1. ?切片制備?

    • 石蠟切片厚度建議5μm,需經(jīng)脫蠟、水化及抗原修復(fù)處理

    • 冷凍切片需避免反復(fù)凍融,厚度通常為8-10μm

  2. ?免疫染色?

    • 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶(3% H?O?)

    • 血清封閉后滴加一抗(4℃過夜)

    • 二抗孵育及DAB顯色

    • 采用ABC法或PAP法,步驟包括:

    • 熒光染色需避光操作,常用熒光二抗標(biāo)記

  3. ?對照設(shè)置?

    • 需設(shè)陰性對照(PBS替代一抗)和陽性對照(已知陽性組織)


三、結(jié)果分析

  1. ?顯微鏡觀察?

    • 心鈉素陽性顆粒主要分布于心房肌細(xì)胞胞質(zhì),右心耳表達(dá)

    • 膠原纖維(Col Ⅰ/Ⅲ)可通過Masson染色輔助評估纖維化程度

  2. ?圖像處理?

    • 使用圖像分析軟件定量陽性信號面積或光密度值


四、注意事項(xiàng)

  • 組織固定時間不超過24小時,避免抗原丟失

  • 蛋白酶消化新生心肌細(xì)胞時需嚴(yán)格控制時間(第一次8分鐘,后續(xù)2分鐘/次)

  • 力竭運(yùn)動模型可能影響心鈉素表達(dá),需規(guī)范動物分組

如需特定蛋白(如P物質(zhì)、心房肽)的檢測方法,可進(jìn)一步結(jié)合熒光染色或乙醛酸誘發(fā)熒光法





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