GV3101 感受態(tài)細(xì)胞
- 公司名稱(chēng) 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2021/3/11 21:06:19
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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GV3101 感受態(tài)細(xì)胞基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline
GV3101 感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說(shuō)明
GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：gent，賦予GV3101菌株慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作，本公司生產(chǎn)的GV3101化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
（當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時(shí)，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時(shí)，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。
GV3101 感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml，過(guò)高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素，Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
備注
1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素（carb） | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素（kan） | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素（strep） | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平（rif） | DMSO溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素（gent） | 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
2、常用農(nóng)桿菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 慶大霉素(gent) | 硫酸卡那霉素(kan) |
AGL-1 | R | S | R | S | S |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
3、LB及YEB配方：
component | LB(液體)/L | LB(固體)/L | component | YEB(液體)/L | YEB(固體)/L |
Tryptone | 10 g | 10 g | Tryptone | 5 g | 5 g |
Yeast extract | 5 g | 5 g | Yeast extract | 1 g | 1 g |
NaCl | 10 g | 10 g | 牛肉浸膏 | 5 g | 5 g |
NaOH | 調(diào)PH到7.0 | 調(diào)PH到7.0 | 蔗糖 | 5 g | 5 g |
Agar | － | 15 g | MgSO4*7H2O | 0.49 g | 0.49 g |
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| NaOH | 調(diào)PH到7.0 | 調(diào)PH到7.0 |
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| Agar | － | 15 g |
10種農(nóng)桿菌化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)產(chǎn)品僅需冰、液氮和37℃ 熱激操作即可，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單方便，經(jīng)pCAMBIA2301 (11.6 Kb)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×104 cfu/μg。同時(shí)提供7種農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)產(chǎn)品，可成功轉(zhuǎn)化大于50 Kb的載體，經(jīng)pCAMBIA2301 (11.6 Kb)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×105 cfu/μg。
| 感受態(tài)種類(lèi) | 轉(zhuǎn)化方法 | 應(yīng)用 |
| GV3101 | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物轉(zhuǎn)基因操作 |
| EHA105 | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作 |
| AGL1 | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 適用于水稻、擬南芥、楊樹(shù)等植物的轉(zhuǎn)基因操作 |
| LBA4404 | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 適用于菸草、番茄、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作 |
| EHA101 | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作 |
| GV3101(pSoup) | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制 |
| GV3101(pSoup-p19) | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup-p19，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制 |
| GV3101(pJIC SA_Rep) | 化轉(zhuǎn) 電轉(zhuǎn) | 含輔助質(zhì)粒：pJIC SA_Rep，可幫助pgR106，pgR107，pGreen，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制 |
| EHA105(pSoup) | 化轉(zhuǎn) | 在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制 |
| AGL1(pSoup) | 化轉(zhuǎn) | 在AGL1菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制 |
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