柱式質(zhì)粒提取試劑盒
- 公司名稱 安諾倫(北京)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2023/12/28 16:11:59
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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使用步驟
1、取 5-15 mL 過夜培養(yǎng)菌液加入離心管中,12000 pm 離心 1 min 收集菌體沉淀,盡量吸棄上清。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 500 uL Buffer P1 (已加入RNase A),使用移液槍或旋振蕩器充分混勻,懸浮菌體沉淀,混勻至無菌塊。
3、向離心管中加入 500 uL Bufcr P2,溫和上下顛倒混勻 4-6 次,充分混勻使菌體裂解,此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠。
注意:溫和地混勻,不要?jiǎng)×艺鹗?,以免打斷基因組 DNA。所用時(shí)間不應(yīng)超過 5 min,以免質(zhì)粒受到破壞
4、向離心管中加入 700 uL Bufer P3,立即溫和上下顛倒混勻 8-10 次,充分混勻,此時(shí)應(yīng)
出現(xiàn)白色絮狀沉淀,12000 rpm 離心 10 min。注意: P3 加入后立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果離心完仍有沉淀漂浮,可延長離心時(shí)間取上清。
5、將步驟 4 中的上清液分批轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱中,12000 rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。注意:一根吸附柱最大容積為 750 uL,請分兩次轉(zhuǎn)移上清液到吸附柱中。
6、向吸附柱中加入 500 uL Bufer PD,12000 rpm 離心 1 min,棄廢液。
7、向吸附柱中加入 600 uL Buffer PW (使用前請確認(rèn)是否加入無水乙醇),12000rpm 離心1 min,棄廢液。
注意:加入漂洗液 PW 后,室溫靜置 2-5 min,有助于更好的去除雜質(zhì)。
8、重復(fù)一次步驟 7。
9、將吸附柱重新放回收集管中,12,000 rpm 離心 2 min,目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液。注意:乙醇?xì)埩魰种坪罄m(xù)的酶反應(yīng),建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數(shù)分鐘,確保乙醇揮發(fā)干凈。
10、將吸附柱放到一個(gè)干凈滅菌 1.5 L 離心管中,將吸附柱開蓋靜置數(shù)分鐘。向吸附膜中間位置懸空滴加 50-100 uL Buffer TE 或 ddHO (可提前放在 5565 C水浴鍋中預(yù)熱,提高質(zhì)粒 DNA 回收率),室溫放置 2 min。12,000 rpm ,離心 2 min 收集質(zhì)粒 DNA 溶液(若需要獲得最高產(chǎn)量,建議將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,重復(fù)第 10 步進(jìn)行二次洗脫。)。
11、質(zhì)粒溶液保存在- 20C。
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