Cell Counting Kit-8 CCK-8試劑盒細(xì)胞活力檢測(cè)細(xì)胞增殖或毒性

規(guī)格：100T/500T/1000T/5000T  價(jià)格:40/220/350/950元,

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒含有WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，在電子載體存在的情況下WST-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶氧化還原后生成水溶性的橙黃色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。CCK-8法是用于測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測(cè)法,可替代傳統(tǒng)的MTT法。

試劑盒組份

目錄號(hào) 組   份 規(guī)格 儲(chǔ)存條件

CCK-8溶液 1mL（100 assays） 4℃避光，一年有效

CCK-8溶液 5mL（500 assays） 4℃避光，一年有效

CCK-8溶液 10mL（1000 assays） 4℃避光，一年有效

CCK-8溶液 30mL（3000 assays） 4℃避光，一年有效

CCK-8溶液 50mL（5000 assays） 4℃避光，一年有效

CCK-8溶液 100mL（10000 assays） 4℃避光，一年有效

試劑盒以外自備儀器和試劑

低速離心機(jī)、酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）、平板搖床、微量移液器、96孔培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱

操作步驟

1. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100ul （2000個(gè)細(xì)胞），細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100ul（10000個(gè)細(xì)胞） (具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí) (在37℃，5% CO2的條件下)。2. 按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10ul特定的藥物刺激。3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 24小時(shí)或48小時(shí))。4. 每孔加入10ul  CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200ul，則需加入20ul CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。 (盡量不要在孔中生成氣泡)5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。7. 如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M HCl溶液或者1%（W/V）SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。結(jié)果判斷(1) 細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD值減去本底OD值（**培養(yǎng)基加CCK-8，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD值取均數(shù)±SD。                細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T為加藥細(xì)胞的OD值，C為對(duì)照細(xì)胞的OD值。                細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100            (2) 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)或T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。

保存條件

4℃避光，一年有效

注意事項(xiàng)

1. 接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種數(shù)孔即混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基或無菌PBS，而不作為指標(biāo)檢測(cè)孔。2. CCK- 8的最佳反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的最佳時(shí)間為準(zhǔn)。第一次做實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議先做數(shù)孔摸索接種細(xì)胞的最佳數(shù)量和加入CCK-8試劑后的最佳孵育時(shí)間。一般情況下，白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長(zhǎng)的CCK- 8反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量 (～105個(gè)細(xì)胞/孔)。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難顯色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在加入CCK- 8孵育1- 4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測(cè)染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定CCK- 8最佳孵育時(shí)間。若顯色困難，可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再測(cè)定。對(duì)于貼壁細(xì)胞，CCK- 8的孵育時(shí)間一般為1- 4小時(shí)，多數(shù)細(xì)胞在培養(yǎng)30分鐘左右即可肉眼觀察到明顯的顯色反應(yīng)，培養(yǎng)2-4小時(shí)左右檢測(cè)****。3. 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。含有酚紅的培養(yǎng)基不影響本試劑盒做細(xì)胞活性的測(cè)定。4. 如何判定待測(cè)溶液是否有還原性？不含細(xì)胞的待測(cè)溶液孔中加入CCK-8溶液10μl，孵育1-4小時(shí)，測(cè)定在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待檢測(cè)體系中存在較少的還原劑，正式檢測(cè)時(shí)即可直接加入CCK-8 ；如果該吸光度相對(duì)較大，說明待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，正式檢測(cè)時(shí)則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進(jìn)行檢測(cè)。5. 如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，建議設(shè)定600 nm (或600 nm以上) 作為參比波長(zhǎng)，扣除參比波長(zhǎng)的O.D值即可。6. 請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。