C9338 NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

諾博萊德 NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞

NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞    載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號(hào)：C9338

產(chǎn)品名稱(chēng)：NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderC9338 NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌NEB10-beta菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/μg。

基因型:

araD139?(ara-leu)7697fhuAlacX74galK(f80?(lacZ)M15)mcrAgalUrecA1endA1nupGrpsL(StrR)?(mrr-hsd RMS mcrBC)

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 大腸桿菌K12菌株背景，DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有鏈mei素抗性基因(StrR)。

2. 可轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒和BACs。

3. DNA重組缺陷(recA1)和內(nèi)切酶I缺陷(endA1)的特點(diǎn)有利于DNA克隆的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

4. 對(duì)T1噬菌體有抵抗能力（fhuA2）。

5. 無(wú)需添加IPTG，只加X(jué)-gal即可檢測(cè)β半乳糖苷酶活性，用于藍(lán)白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。

2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

4. 向每個(gè)離心管中加入500μL無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃150rpm，搖床振蕩培養(yǎng)60分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5. 無(wú)菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的LB固體培養(yǎng)基平板上，用無(wú)菌的細(xì)菌涂布器或玻璃珠將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長(zhǎng)情況決定去留。

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到*低。

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C9338 NEB10-beta感受態(tài)細(xì)胞  20*100ul