BG6021 亞硝酸還原酶試劑盒 氮代謝
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BG6021
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/4/1 8:56:09
- 訪問次數(shù) 34
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BG6021 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 可以將亞硝酸鹽降解為 NO 或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累 |
亞硝酸還原酶（Nitrite reductase，NiR）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
亞硝酸還原酶試劑盒 氮代謝
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
硝酸還原酶（NiR）是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶，廣泛存在于微生物及植物體內(nèi)，是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶，可以將亞硝酸鹽降解為 NO 或NH3，從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累，降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。
測(cè)定原理：
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的 NO —減少，即540nm 處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BG6021-50T/24S | Storage |
提取液：液體 | 80ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：液體 | 12ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 25ml | 4℃避光 |
試劑五：液體 | 25ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 12ml 蒸餾水溶解。
試劑三：液體 12ml×1 瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解）
試劑四：液體 25ml×1 瓶，4℃避光保存。（如出現(xiàn)沉淀可以 70-80℃加熱溶解）工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以 1:1 的比例混合。
自備儀器和用品：
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1ml 玻璃比色皿。
酶液提?。?/span>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表：
空白管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
樣本（μl） | 100 | 100 | |
蒸餾水（μl） | 100 | 200 | |
試劑一（μl） | 200 | 200 | |
試劑二（μl） | 200 | 200 | 200 |
混勻后，25℃反應(yīng) 1h | |||
試劑三（μl） | 200 | 200 | 200 |
充分震蕩 30S | |||
上清液（μl） | 350 | 350 | 350 |
工作液（μl） | 700 | 700 | 700 |
充分混勻，蒸餾水調(diào)零，靜置 3min 后測(cè)定 540nm 處吸光值，分別記 為A 空白管、A 對(duì)照管、A 測(cè)定管?？瞻坠苤灰鲆还?，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 | |||
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）。
按照蛋白含量計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每小時(shí)還原 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR（μmol/h /mg prot）= [A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V 標(biāo)÷（V 樣×Cpr）÷T = 1.47×（A
空白管-A 測(cè)定管+A 對(duì)照管-0.0072）÷Cpr
按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每小時(shí)還原 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR（μmol/h/g 鮮重）=[A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V 標(biāo)÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T = 1.47×
（A 空白管-A 測(cè)定管+A 對(duì)照管-0.0072）÷W
按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每小時(shí)還原 1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR（μmol/h /104 cell）= [A 空白管-(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V 標(biāo)÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）
÷T = 1.47×（A 空白管-A 測(cè)定管+A 對(duì)照管-0.0072）÷細(xì)胞數(shù)量
V 標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.2ml；V 樣：體系中加入樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1h； Cpr：樣本蛋白含量；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
配制好的工作液 3 天內(nèi)使用完。
若吸光值超過 3，將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
嚴(yán)格控制顯色時(shí)間，否則會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。
A 空白管-（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）線性范圍為 0.02-3。
亞硝酸還原酶試劑盒 氮代謝
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