布魯氏菌抗體酶聯(lián)免疫吸附測定檢測試劑盒

1. 產(chǎn)品名稱

布魯氏菌抗體IgG酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測試劑盒。

2. 用途

本試劑盒用于定性或定量檢測人血清或血漿樣本中的布魯氏菌IgG抗體。

3. 檢測原理

• 酶標(biāo)二抗”復(fù)合物。

• 再次洗滌：洗去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

• 加底物：加入顯色底物TMB。在HRP的催化下，無色的TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。

• 終止反應(yīng)：加入終止液，反應(yīng)停止，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

• 讀數(shù)：用酶標(biāo)儀在450nm波長（參比波長630nm）下測量各孔的吸光度（OD值）。OD值的高低與樣本中布魯氏菌IgG抗體的含量成正比。

4. 主要組分

• 預(yù)包被微孔板：1板（12條×8孔），可拆卸。

• 陰性對照血清：1瓶（通常0.5-1.0mL）。

• 陽性對照血清：1瓶（通常0.5-1.0mL）。

• 校準(zhǔn)品/臨界值校準(zhǔn)品：有時(shí)提供，用于精確計(jì)算Cut-off值。

• 樣本XI釋液：1瓶（30-50mL）。

• 酶標(biāo) conjugate （HRP-抗人IgG）：1瓶（10-20mL）。

• 濃縮洗滌液（20×或25×）：1瓶（50mL），使用前需用蒸餾水或去離子水稀釋。

• 顯色底物A液和B液（TMB A/B）：各1瓶（10-15mL）。

• 終止液：1瓶（10-15mL）。

• 封板膜：若干張。

• 說明書：1份。

5. 樣本要求

類型：人血清或血漿。

處理：樣本應(yīng)清澈透明，無溶血、無脂血、無微生物污染。避免反復(fù)凍融。2-8℃可短期保存（7天），如需長期保存應(yīng)置于-20℃以下。

滅活：檢測布魯氏菌時(shí)，血清樣本通常需要在56℃水浴中滅活30分鐘，以消除補(bǔ)體和其他非特異性因素的干擾。請務(wù)必遵循具體試劑盒說明是否需要進(jìn)行此步驟。

6. 操作步驟

• 準(zhǔn)備工作：將所有試劑和樣本恢復(fù)至室溫（18-25℃）。配制好工作濃度的洗滌液。

• 設(shè)孔：設(shè)置空白孔（僅加底物和終止液）、陰性對照孔、陽性對照孔和樣本孔。

• 加樣：在相應(yīng)孔中加入100μL已稀釋的陰性對照、陽性對照和待測樣本。

• 孵育：蓋上封板膜，37℃孵育30-60分鐘。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)洗滌5次，最后在吸水紙上拍干。

• 加酶：每孔加入100μL酶標(biāo)二抗（除空白孔外）。

• 孵育：蓋上封板膜，37℃孵育30分鐘。

• 洗滌：重復(fù)步驟5的洗滌過程。

• 顯色：每孔（包括空白孔）依次加入底物A液和B液各50μL，避光37℃孵育10-15分鐘。

• 終止：每孔加入50μL終止液，顏色由藍(lán)變黃。

• 讀數(shù)：在加入終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀于450nm波長下測量各孔的OD值。

7. 結(jié)果計(jì)算與判讀

臨界值（Cut-off值）的計(jì)算是核心，常見公式如下：

常用公式：Cut-off值 = 陰性對照平均OD值 × 2.1

如果陰性對照平均OD值小于0.05，則按0.05計(jì)算。

有校準(zhǔn)品時(shí)的公式：Cut-off值 = 校準(zhǔn)品OD值 × 校正系數(shù)。

結(jié)果判讀：

陰性（-）：樣本OD值 < Cut-off值

陽性（+）：樣本OD值 ≥ Cut-off值

注：定量試劑盒會(huì)通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣本的確切抗體濃度（如IU/mL）。

8. 性能指標(biāo)（典型值）

靈敏度：>99%（檢出真陽性的能力）

特異性：>98%（排除真陰性的能力）

精密度：板內(nèi)、板間變異系數(shù)（CV）< 15%

符合率：與試管凝集試驗(yàn)（SAT）或其他參考方法的符合率>95%

9. 注意事項(xiàng)

?? 本品僅用于體外診斷。

?? 所有試劑和樣本都應(yīng)按潛在生物危害物質(zhì)處理。

?? 操作時(shí)需戴手套，避免直接接觸。

?? 不同批次的試劑不得混用。

?? 嚴(yán)格遵守操作時(shí)間和溫度。

?? 顯色底物應(yīng)避光保存，一旦變?yōu)樗{(lán)色即不可使用。

?? 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀、接觸史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如SAT、PCR、血培養(yǎng)）進(jìn)行綜合判斷。

10. 儲存與有效期

儲存：2-8℃避光保存，切勿冷凍（除標(biāo)注可冷凍的組分外）。

有效期：通常為6-12個(gè)月，詳見外包裝標(biāo)簽。

注意：在實(shí)際應(yīng)用中請以您實(shí)際使用的試劑盒附帶說明書為準(zhǔn)。

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