二氧化碳培養(yǎng)箱在生物醫(yī)學研究，尤其是癌癥研究中扮演著關鍵角色。下面我們一起看下如何在二氧化碳培養(yǎng)箱中體外培養(yǎng)癌細胞，以利于對癌細胞生物學行為和治療反應的研究。

實驗所需材料與設備：

       ※二氧化碳培養(yǎng)箱：用于保持恒定的實驗環(huán)境，包括溫度、濕度和CO2濃度。

       ※癌細胞株：挑選適宜的癌細胞株，例如人肺癌細胞或乳腺癌細胞等。

       ※培養(yǎng)基：依據(jù)細胞類型挑選相應的培養(yǎng)基，通常包含必需的營養(yǎng)成分、生長因子和抗生素。

       ※實驗試劑與耗材：包括胰蛋白酶、血清、培養(yǎng)容器、移液器等。

實驗操作步驟：

步驟一：培養(yǎng)基的準備

       1.依據(jù)所選細胞株的要求配制相應的培養(yǎng)基。

       2.將配制好的培養(yǎng)基無菌條件下分裝至培養(yǎng)容器中，每個容器大約裝入20ml。

步驟二：細胞的接種

        1.從液氮罐中取出凍存的癌細胞株，迅速在37°C水浴中解凍。

        2.采用胰蛋白酶對細胞進行消化，制備成單細胞懸液。

        3.對細胞進行計數(shù)，調(diào)整細胞密度至適當?shù)乃剑ㄍǔ?x10^5個細胞/ml）。

        4.將細胞懸液加入預先準備好的培養(yǎng)容器中，每個容器中加入大約2ml。

步驟三：細胞的培養(yǎng)

        1.將裝有細胞的培養(yǎng)容器放入二氧化碳培養(yǎng)箱，設定適當?shù)臏囟龋ㄒ话銥?7°C）、CO2濃度（一般為5%）和濕度。

        2.定期檢查細胞的生長狀況，每隔2-3天更換新鮮培養(yǎng)基。

        3.當細胞覆蓋率達到約80%時，進行下一步的傳代培養(yǎng)。

步驟四：細胞的傳代

        1.棄去原有的培養(yǎng)基，用PBS緩沖液清洗細胞兩次。

        2.加入適量胰蛋白酶消化細胞，輕輕搖晃容器，細胞脫落后，加入新鮮培養(yǎng)基以終止消化過程。

        3.將細胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)容器中，繼續(xù)進行培養(yǎng)。

總結：

        通過在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)癌細胞，研究人員能夠在體外模擬癌細胞生長的環(huán)境，進一步研究癌細胞的生物學特性，并為新型治療策略的開發(fā)提供實驗依據(jù)。

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