(1)取軟毛青霉酸(0.1mg/瓶)1瓶，加入1mL甲醇配制成濃度0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(2) 分別取軟毛青霉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用甲醇稀釋配制成濃度分別為0.1μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

3.1 檢測波長的確定

軟毛青霉酸的紫外掃描圖如下圖所示。從圖中可知，軟毛青霉酸的最大吸收波長為270nm。

3.2 線性關(guān)系

分別進(jìn)樣7個(gè)梯度濃度的軟毛青霉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄峰面積，以進(jìn)樣濃度( x,μg/mL )為橫坐標(biāo)，峰面積( y )為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程：Y=117555X-27508.4(R=0.9996)，結(jié)果顯示軟毛青霉酸在0.001～0.2μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.3 檢測限及定量限

軟毛青霉酸溶液在約10倍信噪比的濃度(S/N=10)即為定量限(LOQ)，LOQ約為0.1μg/mL；約3倍信噪比的濃度(S/N=3)即為檢測限(LOD)，LOD約為0.05μg/mL。

3.4 精密度

取1μg/mL軟毛青霉酸溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，峰面積RSD為0.18%，小于2%，表明儀器精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性

取2μg/mL軟毛青霉酸溶液分別在0、24、28、40h進(jìn)樣，記錄峰面積，峰面積RSD為0.64%，小于2%，表明標(biāo)準(zhǔn)品溶液在0~40h內(nèi)能夠保持穩(wěn)定。

04、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

綜上，得出軟毛青霉酸測定方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果，如下表所示。

UPLC-MS法

02、儀器條件

(1)UPLC條件

色譜柱：Diamonsil^® Plus SCX，150x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99420)

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：10μL

柱溫：35℃

流動(dòng)相：A：水  B：乙腈

梯度設(shè)置：

(2)質(zhì)譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：負(fù)離子掃描

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測

電噴霧電壓：-4500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃

目標(biāo)物峰面積和峰高匯總結(jié)果：