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葡聚糖凝膠的使用方法
閱讀：7868發(fā)布時(shí)間：2016-8-16
葡聚糖凝膠適用于天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。例如：類(lèi)固醇、萜類(lèi)、脂類(lèi)以及小分子多肽等，葡聚糖凝膠同時(shí)適用于分子類(lèi)別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備，既可用于初步純化步驟，也可以用于終精制步驟。
葡聚糖凝膠使用方法：
1. 乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無(wú)鹽水浸泡：室溫下，在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后；
3. 鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗只中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5. 上樣前平衡層析柱少3-5 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；
6. 凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20% 的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1 即可；
7. 洗脫方法：可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；
8. 在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
葡聚糖凝膠使用方法：
1. 乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無(wú)鹽水浸泡：室溫下，在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后；
3. 鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗只中性；
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5. 上樣前平衡層析柱少3-5 個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；
6. 凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20% 的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1 即可；
7. 洗脫方法：可以用無(wú)鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；
8. 在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
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