ELISA試劑盒技術(shù)要點

           ELISA試劑盒的技術(shù)要點包括三個方面：試劑的制備、反應(yīng)條件的選擇和操作的標(biāo)準(zhǔn)化。一、試劑的制備ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。以下敘述這些試劑的原料和制備方法。
         （一）固相載體可作 ELISA試劑盒中載體的物質(zhì)很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。
         （二）抗原和抗體在 ELISA試劑盒實施過程中，抗原和抗體的質(zhì)量是實驗是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。 ELISA試劑盒 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化，提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質(zhì)少。
        （三）免疫吸附劑固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（zui常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，ELISA試劑盒固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)*覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分地吸附于固相載體表面，zui后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。