ELISA試劑盒綜合問題解答（三）

在做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中，難免會遇到各種不同的問題，下面是小編整理的實(shí)驗(yàn)條件選用：

如何選擇合適的陽性對照？ 
陽性對照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致,一般陽性對照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),加入一定量的待檢物質(zhì).比如,以人血清為標(biāo)本的測定,陽性對照多用確定的病人血清或者以復(fù)鈣人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品. 

如何選擇合適的陰性對照？ 
陰性對照的基本組成也應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致,先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì).比如,檢測人血清標(biāo)本時(shí),陰性對照應(yīng)該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價(jià)時(shí),陰性對照應(yīng)該選擇該動物的免疫前血清.

如何正確使用酶結(jié)合物？ 
1.酶結(jié)合物的稀釋液 
在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附.一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜). 

2.正確稀釋酶結(jié)合物 
酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定,濃度過高易導(dǎo)致本底偏高,濃度過低則會導(dǎo)致陽性信號的減弱. 
酶結(jié)合物在使用前稀釋,稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存,因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失活.

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