用溴甲酚紫法測(cè)定白蛋白含量的流程

實(shí)驗(yàn)原理

溴甲酚紫法（BCP法）是一種測(cè)定白蛋白含量的方法。實(shí)驗(yàn)原理為在pH5.2的緩沖液中，有Brij-35存在時(shí)，溴甲酚紫(bromocresol puple，BCP)可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得血清中白蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)原理

在pH5.2的緩沖液中，有Brij-35存在時(shí)，溴甲酚紫(bromocresol puple，BCP)可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得血清中白蛋白含量。

試劑與器材

1．250g/LBrij-35溶液見BCG法

2．50mmol/L BCP貯存液稱取BCP 675mg溶于無(wú)水乙醇15ml中，當(dāng)溶液變?yōu)槌壬该鲿r(shí)，用無(wú)水乙醇稀釋至25ml。置4C冰箱保存至少可穩(wěn)定3個(gè)月。

3．2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸餾水稀釋至1L。

4．BCP試劑稱取無(wú)水醋酸鈉6.03g（或三結(jié)晶水的醋酸鈉10g）溶于蒸餾水950ml中，加Brij-35液1ml，BCP貯存液1ml，用2.5mol/L醋酸溶液調(diào)pH至5.20+0.03（約需10ml），加蒸餾水至1L（BCP貯存液也可在調(diào)好pH后再加）。在室溫可穩(wěn)定一周。

5．0.154mol/L NaCl溶液稱取NaCl9g用蒸餾水溶解至1L。

6．白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液采用人白蛋白或定值，切不可用動(dòng)物血清蛋白。

操作步驟

1．生化自動(dòng)分析儀分析法參數(shù)見有關(guān)儀器操作說明書。

2．手工操作法。

混勻，1min后在波長(zhǎng)603nm處比色，用空白管調(diào)零，讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。

評(píng)價(jià)

本法反應(yīng)最適pH為5.20，接近α-和β-球蛋白的等電點(diǎn)，抑制了這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應(yīng)，故對(duì)測(cè)定白蛋白具有高特異性。此外，BCP與白蛋白的反應(yīng)為即時(shí)*反應(yīng)，不受時(shí)間和溫度變化的影響，呈色后穩(wěn)定1h以上。本法線性范圍5-50g/L,在10-40g呈線性良好,50g/l時(shí)稍偏低；CV為0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要優(yōu)點(diǎn)，克服了BCG法的多數(shù)缺點(diǎn)，與火箭電泳法結(jié)果相一致，成為測(cè)定血清白蛋白燃料結(jié)合法中較好的一個(gè)方法。BCP與牛，豬（新鮮或凍干）血清反應(yīng)性僅為BCG反應(yīng)的1/3，不適用于動(dòng)物血清白蛋白作質(zhì)量控制，機(jī)制尚待闡明。