淋巴細胞分離液的原理及注意事項

淋巴細胞分離液是一種根據(jù)細胞密度差異，借助離心產(chǎn)生的重力加速度，進行細胞的分離純化的常用試劑?？捎糜隗w外分離外周淋巴血細胞，也可以從其他來源中分離單核細胞，包括臍帶血細胞和骨髓細胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞，在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物中廣泛應(yīng)用。其他人及動物多種比重細胞分離液。

 淋巴細胞分離液的原理：

 外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。

 淋巴細胞分離液使用時需要注意：

 1．在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫至18-22℃。為獲得理想的實驗結(jié)果，在取血后2小時內(nèi)進行實驗，血液提取后存放時間越長細胞活性越低。

2．實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導(dǎo)致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

3．抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會影響細胞活性。應(yīng)注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。

4．實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內(nèi)毒素會激活淋巴細胞從而降低細胞得率及活性。

5．不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

6．吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

7．如需進行B、T細胞計數(shù)，則需血液貯藏時間不得多于10小時，否則將導(dǎo)致細胞被激活，得率降低。

8．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進行二次離心。