蛋白酶k在DNA提取中的作用

蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中純化得到。蛋白酶k，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶k在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶k的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH4-12.5）均有活性。值得注意的是，蛋白酶k在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào).但蛋白酶k的濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶k的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。

在生物相關(guān)的領(lǐng)域當(dāng)中，經(jīng)常需要對(duì)DNA進(jìn)行提取分析，這樣就可以快速有效地判斷生物種類，還可以更深入地對(duì)基因組成進(jìn)行研究，而這類研究當(dāng)中非常關(guān)鍵的一步就是從細(xì)胞當(dāng)中提取出DNA。要知道DNA處在細(xì)胞核當(dāng)中，如果采取簡(jiǎn)單粗暴的手段來破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，也會(huì)同時(shí)破壞了更加脆弱的DNA結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致研究無法繼續(xù)進(jìn)行下去。而有了蛋白酶k的幫助，就能有效分解細(xì)胞當(dāng)中的所有蛋白質(zhì)，從而把細(xì)胞核里面的DNA釋放出來，而且結(jié)構(gòu)不會(huì)受影響。提取出來的DNA不但能夠保持完整性，而且還保持了生命的活性，能夠通過簡(jiǎn)單的方式進(jìn)行增殖。

那么如何才能更好的保存蛋白酶k呢？

只要將蛋白酶k保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，就能有效保證12個(gè)月。而使用時(shí)也要注意，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)；理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。

以上為大家介紹的就是蛋白酶k在DNA提取中的作用，有了這種技術(shù)，也就可以更方便更準(zhǔn)確地進(jìn)行生物基因領(lǐng)域的研究。目前這種技術(shù)也進(jìn)入到了實(shí)際的生產(chǎn)當(dāng)中，在遺傳育種以及疾病治療當(dāng)中都發(fā)揮了重要的用途。