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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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細(xì)胞免疫熒光的詳細(xì)操作步驟

時(shí)間：2023/6/20閱讀：742
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免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

1、取出細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。注意有的時(shí)候作的細(xì)胞爬片可能比較小，因此夾取的時(shí)候要小心。
2、4%多聚甲Q固定20分鐘，PBS洗三遍。
3、0.2%Triton X 100通透10分鐘，PBS洗三遍。
4、與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。
5、一抗4度濕盒內(nèi)過夜，也可37度2小時(shí)，感覺前者效果好，PBS洗三遍。
6、二抗室溫2小時(shí)，或者37度1半小時(shí)，PBS洗三遍。
7、最好用DAPI染核，然后直接照熒光片。
8、蒸餾水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。

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