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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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如何用PBS清洗細(xì)胞？

時(shí)間：2023/7/6閱讀：954
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一：取材

撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2～3mm2置于載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。（撕取的材料大小適中，且為內(nèi)表皮）

二：去垢處理

用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液，加2～3滴37°C預(yù)溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。（吸水紙不要直接在材料上面吸，以免帶丟材料，去垢處理過程中不要讓材料干燥）

三：沖洗

吸去 1%Triton，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復(fù)兩至三次。

四：固定

用吸水紙吸盡PBS緩沖液，加2滴3%戊二醛固定約20分鐘。

五：沖洗

吸去3%戊二醛固定液，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復(fù)兩至三次。

六：染色

吸去PBS緩沖液，滴幾滴0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染料，染色約10分鐘。

七：制片

加蓋蓋玻片，用吸水紙吸去多余染料。（加蓋玻片時(shí)傾斜放置，避免氣泡產(chǎn)生；吸去多余染料時(shí)僅吸去蓋玻片四周溢出的染料，不要太干，以免產(chǎn)生氣泡）

八：觀察

觀察將制好的玻片置于低倍鏡下，可見到規(guī)則排列的多邊形洋蔥表皮細(xì)胞輪廓，在細(xì)胞質(zhì)中可見到被染成藍(lán)色的粗細(xì)不等的分枝狀或點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，這就是細(xì)胞骨架。然后轉(zhuǎn)高倍鏡繼續(xù)觀察，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋可見到細(xì)胞骨架的立體結(jié)構(gòu)。


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