抗組蛋白抗體（AHA）測定

抗組蛋白抗體（AHA）測定

    組蛋白是一種與DNA結(jié)合的富含賴氨酸與精氨酸的堿性蛋白，由H1、U2A、H2B、H3、H₄ 5個(gè)亞單位構(gòu)成。藥物性紅斑狼瘡和SEE病人血清中有抗組蛋白抗體（antihistonic antibody，AHA），RA病人血清中也可測到AHA。目前檢測AHA方法甚多，但以EHSA法和熒光抗體法較實(shí)用。現(xiàn)介紹ELISA法檢測AHA。

    1．試劑  組蛋白抗原：可購買商品或從小牛胸腺中制備，并經(jīng)SDS-PAGE證實(shí)有5個(gè)亞單位。

    2．操作步驟  以2．5ug／mL組蛋白抗原200~L包被聚苯乙烯微孔板，置4℃ 20h后，棄去抗原包被液，加入0．3％明膠溶液以阻斷未被抗原包被的部位。次日加入待測血清200uL（稀釋成1：200），室溫孵育2h，經(jīng)PBS-吐溫及PBS緩沖液洗滌后，加入zui適工作濃度的HRP標(biāo)記的羊抗人IRC或羊抗人IgM各200mL，室溫孵育2h后，分別以PBS-吐溫和PBS溶液沖洗各3次，加入底物2，2’-連氮-雙[3—乙基苯并噻唑啉-6—磺酸鹽]（ABTS）200uL，置室溫孵育2h后，以410nm測定各孔吸光度（A）。A值大于正常值范圍定為陽性。

    3．正常參考值與臨床意義  因檢測方法不同，AHA的正常值范圍也各異。應(yīng)在建立方法后，各自訂出正常值范圍。如唐福林等（1990）采用上述ELISA法檢測AHA的A值X二0．324，2S：0．219（正常值范圍0．105—0．543），A值大于0.543視為陽性。

    AHA在藥物性狼瘡病人中陽性率達(dá)90％—100％，且與Sm或RNP呈交叉反應(yīng)，而自發(fā)性SLE病人中陽性率僅為20％—35％，且大多出現(xiàn)在疾病活動(dòng)期，抗體是H1、H3-H4組分。以kG-AHA為主的SLE病人，其心包炎、腎炎、關(guān)節(jié)炎發(fā)生率高于以IgM-AHA為主的SLE病人，因此IeC-AHA測定有助于臨床治療的監(jiān)測。BA病人的AHA陽性率也較高（可達(dá)36％），以IgM-AHA為主，與AHA陰性者相比，關(guān)節(jié)外表現(xiàn)更為突出，可作為診斷時(shí)參考。

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