ENA多肽抗體譜檢測

ENA多肽抗體譜檢測

    核抗原有三個(gè)組成部分：組蛋白、DNA、可溶性核抗原，后者因可溶于磷酸鹽緩沖液（或生理鹽水）中，故名可提取核抗原（extractable nuclear antigen，ENA）。從分子水平識別ENA多肽抗體是20世紀(jì)80年代抗核抗體研究的重大進(jìn)展，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)這類抗體有十余種，抗ENA抗體為其總稱。

    檢測ENA抗體過去多用瓊脂雙向擴(kuò)散、對流免疫電泳，近年來也建立ELISA法?，F(xiàn)已從免疫擴(kuò)散法發(fā)展到與分子生物學(xué)有關(guān)的免疫印跡技術(shù)（1BT），且國內(nèi)已有抗ENA多肽抗體譜檢測試劑盒出售。IBT與對流電泳和雙擴(kuò)法相比，更敏感特異，且操作簡單快速，不需特殊設(shè)備，整個(gè)檢測時(shí)間一個(gè)半小時(shí)即可完成，能在各級醫(yī)院應(yīng)用，從而將風(fēng)濕性疾病的診斷和鑒別診斷提高到分子水平。

    1，ENA多肽抗體譜檢測原理  通過對抗原抽提及酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)的改進(jìn)，將抗原中的蛋白質(zhì)分子按分子量大小分離后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，通過與抗體反應(yīng)，觀察與特異性抗體反應(yīng)的多肽的分子量和數(shù)量，不僅可以用來檢測自身抗體，還可用于抗原分子的組成及抗原表位的研究。試劑盒中已將具有7種不同抗原性的ENA，如Sm、ulRNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70和Rib等印跡在硝酸纖維素膜上，可通過IBT一次檢測這7種自身抗體。

    2．試劑  試劑盒內(nèi)有濃縮洗滌液、酶標(biāo)抗體、顯色劑A、顯色劑B、終止液、印跡薄膜。

    3．操作步驟

    （1）將濃縮洗滌液用蒸餾水按說明書進(jìn)行稀釋，然后每槽各加lmL，同時(shí)每槽加待測血清lOpL，充分混勻，置37℃孵育30rain。

    （2）取出反應(yīng)槽，棄去槽中液體，用吸水紙吸干，加入已預(yù)溫37％的洗滌液，搖動(dòng)洗滌4次，每次每槽加lmL，洗1min。

    （3）每槽加入洗滌液0．5mL，再加所提供的酶標(biāo)抗體10uL，混勻后置37％孵育30rain。

    （4）同上洗滌后，加入顯色劑A0．5mL+顯色劑B0．5mL，作用5～10min。

    （5）待陽性帶顯色清晰，即加終止液0．5mL，2min后棄去液體，用自來水洗滌后取出薄膜，待干后即可判斷結(jié)果。

    4．結(jié)果判斷  將薄膜上顯色帶與陽性標(biāo)準(zhǔn)帶對照即可判斷出陽性自身抗體。如：①顯色區(qū)帶是29kD、28kD、13．5kD為抗Sm抗體；②顯色區(qū)帶是73kD、32kD、17．5kD為

抗ulRNP抗體；③顯色區(qū)帶是52kD為抗SSA抗體；④顯色區(qū)帶是48kD、47kD、45kD為抗SSB抗體；⑤顯色區(qū)帶是86kD、70kD為抗Scl-70抗體；⑥顯色區(qū)帶是55kD為抗Jo-1抗體；⑦顯色區(qū)帶是38kD、16．5kD、15kD為抗Rib抗體。

    5．注意事項(xiàng)  ①判斷結(jié)果時(shí)，應(yīng)將薄膜記號線與標(biāo)準(zhǔn)帶“0”線對齊；②不同批號的標(biāo)

準(zhǔn)帶不可混用。

    6。臨床意義  抗Sm是SLE的標(biāo)志抗體且與狼瘡性腎炎活動(dòng)程度相關(guān)?？?/span>ulRNP是MCTD的標(biāo)志抗體，少見于SLE、PSS等；抗SS-A和抗SS-B是SS的標(biāo)志抗體，少見于SLE、MCTD、PSS等；抗Scl-70是PSS的標(biāo)志抗體；抗Jo—1是PM／DM的標(biāo)志抗體；抗Rib是SLE的標(biāo)志抗體，少見于PSS等。

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