IL-4的檢測(cè)生物學(xué)及免疫學(xué)方法

IL-4的檢測(cè)生物學(xué)及免疫學(xué)方法

    1、IL-4與LPS共刺激B細(xì)胞分泌IgG1和IgE的測(cè)定小鼠B淋巴細(xì)胞在LPS刺激下首先分泌IgM和IgG3、IgG2b。當(dāng)IL-4作用于LPS刺激的B細(xì)胞時(shí)，IgM、ISC3、IgG2b合成產(chǎn)物明顯減少，而IgE、IgCl合成產(chǎn)物顯著地增加。在細(xì)胞培養(yǎng)5-6d后，收獲上清，通過(guò)對(duì)IgE和IgCl測(cè)定，間接了解IL-4的含量。IgE測(cè)定用放射免疫法；IgCl含量測(cè)定可采用雙抗體ELISA夾心法。

    2、依賴株CT．4S的增殖試驗(yàn)  CT．4S細(xì)胞是依賴于IL-4，對(duì)IL-2低反應(yīng)的CTLL變異株，其增殖反應(yīng)（用3H-TdR摻人量來(lái)反映）與IL-4呈劑量相關(guān)。操作步驟基本同前述用CTLL-2測(cè)IL-2，但應(yīng)設(shè)置rIL-2對(duì)照，以進(jìn)一步排除IL-2對(duì)結(jié)果的影響。

    CT．4S細(xì)胞是一類粘附細(xì)胞，在收獲細(xì)胞時(shí)，可先用0．25％胰酶消化。CT．4S細(xì)胞雖是IL4依賴株，但待測(cè)樣品中IL-2含量過(guò)高（>100U／mL）或IL4含量過(guò)高，均影響IL-4測(cè)定。因此在進(jìn)行大批試驗(yàn)時(shí)，對(duì)待測(cè)樣品應(yīng)進(jìn)行預(yù)測(cè)，以便將樣品稀釋至該法zui敏感的檢測(cè)范圍之內(nèi)。

    3、轉(zhuǎn)染人IL-4受體的CTLL-2細(xì)胞測(cè)定人IL-4  由于IL-4的種屬特異性，人、鼠之間沒(méi)有交叉反應(yīng)，故可將人IL-4受體基因轉(zhuǎn)染到IL-2依賴株CTLL-2細(xì)胞系中，使這種細(xì)胞同時(shí)表達(dá)小鼠IL-2受體和人IL-4受體，因此，可常規(guī)維持在含IL-2的培養(yǎng)基中，并可用于檢則重組人IL-4或封閉IL-2活性后的混合樣品中的人IL-4活性。

    4、雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)誘生上清IL-4含量  以免抗IL-4多克隆抗體包被反應(yīng)板，以酶標(biāo)抗IL-4McAb進(jìn)行夾心ELISA法。與標(biāo)準(zhǔn)晶對(duì)比，可測(cè)出誘生上清中的IL-4含量，操作步驟同常規(guī)ELISA。

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