ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-2

ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-2

    IL-2來源于活化的T淋巴細(xì)胞，主要由活化的CD；輔助性T細(xì)胞（T helper lymphocyte，Th）產(chǎn)生，其主要生物學(xué)效應(yīng)表現(xiàn)為：誘導(dǎo)活化T淋巴細(xì)胞及胸腺細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生淋巴因子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，增強(qiáng)NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞及單核細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，加強(qiáng)活化的B細(xì)胞增殖及分化。IL-2受體（1L-SR）又可分為：T、B細(xì)胞及NK細(xì)胞表面的胞膜IL-2受體（mlL-2R）和可溶性IL-2R（slL-2R）兩種。其中，IL-2復(fù)雜的生物學(xué)作用是通過IL-2R介導(dǎo)的，而IL-2又可誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞表達(dá)IL-2R，故Th產(chǎn)生IL-2和表達(dá)IL-2R是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫和體液免疫的中心環(huán)節(jié)，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中處于核心地位，在免疫應(yīng)答過程中起著非常重要的作用。

    [檢測(cè)方法]  ELISA法

    [方法學(xué)原理]  在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-2單克隆抗體，待測(cè)標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-2會(huì)與抗人IL-2單克隆抗體結(jié)合，游離的成分被洗去，同時(shí)加人生物素化的抗人IL-2抗體和HRP標(biāo)記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-2抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-2結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應(yīng)孔中有11．-2，HRP會(huì)使無色的顯色劑呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃色。在波長(zhǎng)450nm處測(cè)吸光度，IL-2濃度與吸光度成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的IL-2濃度。[標(biāo)本準(zhǔn)備]  靜脈血2ml，不抗凝。

    [試劑]

    1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板

    2．濃縮酶結(jié)合物

    3．酶結(jié)合物稀釋液

    4．標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液

    5．濃縮生物素化抗體

    6．IL-2標(biāo)準(zhǔn)品    ．

    7．濃縮洗滌液

    8．顯色劑A、B

    9．終止液

    [儀器]  酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

    [檢測(cè)步驟]

    1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測(cè)樣本、不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品IOOul，再加生物素化抗體工作液50gl。

    2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min。

    3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    4．除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液100u1。

    5．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育30min。

    6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。

    7．每孔加人顯色劑A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色10min。

    8．加入終止液50gl后，輕輕振蕩混勻。用酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照，求出IL-2值。

    [正常參考值]  各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)檢測(cè)方法的不同確立正常參考值范圍。

    [注意事項(xiàng)]

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。

    2．酶標(biāo)板洗滌時(shí)各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。應(yīng)設(shè)定30-60s的洗滌浸泡時(shí)間。

    3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確（注意：勿將試劑滴在孔壁上）。

    4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時(shí)應(yīng)注意安全。

    5．每批樣本應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    6．檢測(cè)劑工作液按說明書臨用前配置。

    7．若標(biāo)本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定范圍以外，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)。

    [臨床意義]  在某些病毒性疾病中，如反復(fù)發(fā)作尖銳濕疣、重癥肝炎、慢性病毒性肝炎等患者中，IL-2顯著降低。

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