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神經生長因子（NGF）的檢測
閱讀：1640 發(fā)布時間：2011-12-17根據(jù)神經生長因子（nervegrowthfactor，NGF）對神經細胞的促增殖作用，可采用PCI2細胞分化試驗檢測其活性。PCI2細胞是大鼠的嗜鉻細胞瘤細胞株，培養(yǎng)于含15％馬血清、5％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中，在普通培養(yǎng)瓶中成團懸浮生長。將培養(yǎng)瓶包被鼠尾膠后，PCI2可貼壁生長。
1．將PCI2置36％，7。5％C02條件下培養(yǎng)，每2天更換2／3培養(yǎng)液，待細胞接近匯合時，用含1mmol／L EGTA的上述培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞6h或過夜，用RPMI-1640／水（1：1）洗滌細胞3次，吹打分離單個細胞，按1：4分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
2．用上述培養(yǎng)液將PCI2細胞配成106／mL，每個35mm培養(yǎng)皿中加入0．5mL細胞懸液和系列稀釋的NGF待測樣品或標準品，設不加NGF為對照。繼續(xù)培養(yǎng)20—24h。
3．在倒置相差顯微鏡下觀察PCI2細胞。細胞成簇生長，計數(shù)100個細胞簇，其中細胞有纖維突起的細胞簇為陽性細胞簇，減去不加NGF對照細胞孔中的陽性細胞簇即為NGF誘導的分化細胞簇數(shù)。以分化細胞簇數(shù)對樣品稀釋度作圖，繪制劑量-反應曲線，計算樣品中NGF的含量。