化學(xué)發(fā)光酶免疫測定

化學(xué)發(fā)光免疫測定（chemiluminesent immunoassay，CLIA）是免疫測定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）和時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測定技術(shù)。其
基本原理是將化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，以檢測樣本中的抗原或抗體，由于它既具有免疫反應(yīng)的高度特異性，又具有發(fā)光反應(yīng)的高敏感性，且對(duì)環(huán)境公害小，因此近年來已被國內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室及科研單位，廣泛應(yīng)用于各種激素、特種蛋白及藥物的監(jiān)測和分析。

化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)根據(jù)其標(biāo)記物的不同可大致分為3大類：化學(xué)發(fā)光酶免疫測定、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定、電化學(xué)發(fā)光免疫測定。

化學(xué)發(fā)光酶免疫測定（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）從標(biāo)記物性質(zhì)來看應(yīng)屬酶免疫測定。CLEIA測定中的兩次抗原抗體反應(yīng)步驟均與酶免疫測定相同，僅zui后一步酶反應(yīng)所用的底物為發(fā)光劑而非顯色劑。CLEIA中常用的兩種標(biāo)記酶是HRP和ALP，其原理如下。

（一）HRP標(biāo)記的CLEIA
HRP標(biāo)記的CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進(jìn)行，通常以pH8．6的0．1mol／LTrig緩沖液作底物液，當(dāng)HRP與魯米諾在堿性環(huán)境下發(fā)生氧化反應(yīng)時(shí)，魯米諾將能量轉(zhuǎn)移并zui終以發(fā)射光子的形式釋放，而光的強(qiáng)度與被測物的濃度成正比；此外，HRP催化魯米諾氧化的反應(yīng)可被某些酚試劑（如鄰碘酚）或螢火蟲熒光素酶等加強(qiáng)。加強(qiáng)劑的作用是增強(qiáng)發(fā)光和延長發(fā)光時(shí)間，由此可提高檢測的敏感度。

（二）ALP標(biāo)記的CLEIA
在以ALP為標(biāo)記酶的CLEIA中，應(yīng)用的底物一般為adamantyl dioxetase phosphate及其衍生物如PPD等。當(dāng)ALP與底物相互作用時(shí)，ALP使底物由能量基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)，當(dāng)非穩(wěn)態(tài)的底物以光子形式將能量轉(zhuǎn)移，并回到基態(tài)時(shí)，其發(fā)光的強(qiáng)度則與被測物的濃度成正比，因此測定反應(yīng)產(chǎn)物的發(fā)光強(qiáng)度即可獲得被測物的濃度