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親和沉淀

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將親和反應(yīng)的高度選擇性、低處理量特性與沉淀操作的大處理量、地選擇性有機(jī)結(jié)合形成了親和沉淀技術(shù)。將配基與可溶性載體偶聯(lián)后形成載體-配基復(fù)合物,該復(fù)合物與生物分子結(jié)合后在一定條件下可以沉淀出來(lái)。

配基-載體復(fù)合物可以選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合,溶液中的pH值、離子強(qiáng)度及蛋白質(zhì)濃度等條件對(duì)親和結(jié)合的影響力并不大,只有競(jìng)爭(zhēng)性的配基會(huì)降低產(chǎn)物與原配基的親和結(jié)合力,甚至使親和結(jié)合發(fā)生逆轉(zhuǎn)。

引導(dǎo)產(chǎn)生沉淀的方法有:離子交聯(lián);加入帶相反電荷的聚合物;加入帶相反電荷的疏水基團(tuán);改變pH值,誘導(dǎo)產(chǎn)生疏水沉淀;溫度誘導(dǎo)產(chǎn)生沉淀。

親和結(jié)合:將親和配基加入到含有目的物蛋白質(zhì)的溶液中,調(diào)節(jié)好有關(guān)沉淀的條件,使之有利于親和結(jié)合。

洗滌:為經(jīng)過(guò)處理的粗制液中發(fā)生親和沉淀可能會(huì)發(fā)生非特異性結(jié)合,尤其是使用帶電的聚合物,離子交換的效應(yīng)將使其他蛋白質(zhì)共同沉淀,因此在分離目的物之前要洗滌沉淀物。其做法是:加入適當(dāng)?shù)那逑磩┲匦氯芙獬恋恚俪恋?;或在?zhuān)一性洗脫之前,*清洗沉淀。在上述過(guò)程中要始終保持目的蛋白質(zhì)與配基處于親和結(jié)合狀態(tài)。

配基-載體復(fù)合物與目的蛋白

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