己糖激酶（HK）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0740
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑二：臨用前加入30 mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存4周；
2、試劑四：臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周；
3、試劑五：臨用前加入3mL 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周；
4、試劑六：臨用前取1支試劑六加入125 μL試劑一和125 μL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存2周。（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實際質(zhì)量相同）
產(chǎn)品說明：
己糖激酶（Hexokinase，HK，EC 2.7.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是葡萄糖分解過程中的第一個關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

2. 最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準確性。

3. 不同勻漿組織中HK活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2次預試驗，若ΔA>0.5，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液，或縮短反應時間至2min，使ΔA<0.5，以提高檢測靈敏度。注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1. 稱取約0.1g 鼠腎，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清用提取液稀釋5倍后置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得計算A1=0.2252，A2=0.3084，ΔA=A2-A1=0.0832，計算己糖激酶活性得：HK活性（U/g 質(zhì)量）=1113×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)=4630.08U/g 質(zhì)量

2. 稱取約0.1g 綠蘿，加入1mL提取液，進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得計算A1=0.1949，A2=0.2184，ΔA=A2-A1=0.0235，計算己糖激酶活性得：HK活性（U/g 質(zhì)量）=1113×ΔA÷W=261.56U/g 質(zhì)量

相關(guān)發(fā)表文獻：

1. Geng M T, Yao Y, Wang Y L, et al. Structure, expression, and functional analysis of the hexokinase gene family in cassava[J]. International journal of molecular sciences, 2017, 18(5): 1041.

2. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.

3. Liu Y, Liang X, Zhang G, et al. Galangin and pinocembrin from propolis ameliorate insulin resistance in HepG2 cells via regulating Akt/mTOR signaling[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2018, 2018.

4. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

參考文獻：

1. Pancera S M, Gliemann H, Schimmel T, et al. Adsorption behavior and activity of hexokinase[J]. Journal of colloid and interface science, 2006, 302(2): 417-423.

2. [1] Galina A, da Silva WS. Hexokinase activity alters sugar-nucleotide formation in maize root homogenates[J]. Phytochemistry, 2000, 53(1): 29-37.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0540/BC0545 *酸激酶（PK）活性檢測試劑盒
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