抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

產品說明：
酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細胞的溶酶體內，所以常作為溶酶體標志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內質網和胞質內。各種動物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜 pH 為 4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬細胞和白血病人脾臟的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在細胞濾泡中，并不是釋放入血液。血液中的 TRAP 絕大多數來源于破骨細胞，因此可以通過測量血液中的 TRAP 了解破骨細胞的功能狀態(tài)。

以萘酚 AS-BI 為底物，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)生成有色產物，定位于細胞質中，若細胞內的 ACP 有抗酒石酸的活性，則呈陽性反應。該染色液可用于新鮮血涂片、細胞涂片，亦可用于冰凍切片、石蠟切片。
自備材料：
1、 蒸餾水、恒溫箱
2、 載玻片、推玻片
3、 光學顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
(一)血液、細胞涂片：
1、 推片：取新鮮血液或骨髓涂片置于載坡片上，推玻片于載玻片保持 30 度，置于血液或細胞滴液的正前方，稍往后移不血液或細胞滴液接觸使后者沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動鋪滿血膜為止。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多數情況下 30～60s 即可。
3、 水洗，稍微晾干(不易過分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 復染：蘇木素染色液染色 5min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。
(二)冰凍切片：
1、 冰凍切片回溫 37℃，水中浸泡 1～2min。
2、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 1～3min。
3、 水洗，稍微晾干(不易過分干燥)。
4、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，避光浸染 45～60min，水洗。
5、 復染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
6、 水洗、晾干、鏡檢。
(三)石蠟切片：
1、 石蠟切片脫蠟 5～10min，重復一次。
2、 無水乙醇 5min，90%乙醇和 70%乙醇各 2min。
3、 水洗 2min。
4、 自然晾干，TRAP 固定液 4℃固定 30s～3min，多數情況下 30～60s 即可。
5、 水洗，稍微晾干(不易過分干燥)。
6、 切片入 TRAP 孵育液，置于 37℃溫箱，浸染 45～60min，水洗。
7、 復染：蘇木素染色液染色 5～8min 或甲基綠染色液染色 2～3min。
8、 水洗、晾干、鏡檢。
染色結果：
陽性顆粒 紫紅色
細胞核 藍色(蘇木素)或綠色(甲基綠)

臨床意義：
1、 毛細胞白血病的毛細胞 ACP 染色呈強陽性或中度陽性，且不被酒石酸抑制，其他細胞均呈陰性或極弱陽性。
2、 急性白血病幼單核細胞 ACP 染色呈陽性，原淋巴細胞呈弱陽性，原粒細胞對 ACP 反應不一。
3、 T 淋巴細胞 ACP 染色呈陽性，顆粒粗大、分布密集。B 淋巴細胞呈陰性或顆粒細小的弱陽性。
4、 戈謝細胞呈強陽性，尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性。

注意事項：
1、 TRAP 孵育液易失效，本法宜用皮膚穿刺血涂片，晾干后應及時染色
2、 對冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。
3、 樣本需新鮮，取材后應立即處理，否則會影響酶的活性。
4、 組織固定需在 4℃冰箱進行，時間不宜超過 24h，否則酶活性會減弱或消失。
5、 組織在石蠟包埋時，溫度不宜高于 56℃。應使用熔點為 52～54℃的石蠟進行浸蠟，浸蠟時間要短，否則酶活性會減弱或消失。
6、 不純的二甲苯會分解黑色沉淀，宜選用 AR 級以上的二甲苯。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液