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島津(上海)實(shí)驗(yàn)器材有限...

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特色應(yīng)用|非衍生法結(jié)合 LC-MSMS 分析 21 種氨基酸

閱讀:35      發(fā)布時(shí)間:2025-10-30
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非衍生法結(jié)合

 LC-MSMS 分析 

21 種氨基酸

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摘要 

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本文建立了21 種氨基酸非衍生法的 LC-MS/MS 測(cè)定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生,直接采用 Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離,島津串聯(lián)質(zhì)譜 LCMS-8050 檢測(cè)分析,21 種氨基酸保留強(qiáng),峰型對(duì)稱,且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測(cè)定提供參考。



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實(shí)驗(yàn)部分

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1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

Shimadzu LC-30AD與LCMS-8050 聯(lián)用系統(tǒng);

色譜柱:Shim-pack GIST Amide(3 μm,2.1×100 mm;P/N:227-30818-04);

SHIMSEN Disc HPPTFE 針式過濾器(P/N:380-00341);

LC-MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);

Nichipet Air 移液槍:

Nichipet Air 0.5-10 μL(P/N:00-NAR-10);

Nichipet Air 10-100 μL(P/N:00-NAR-100) ;

Nichipet Air 100-1000 μL(P/N:00-NAR-1000) ;

Nichipet Air 1000-10000 μL(P/N:00-NAR-10000) 。

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1.2 混合對(duì)照品溶液的制備

分別稱取 21 種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品適量,加水溶解并稀釋至 1 mg/mL,制成各標(biāo)準(zhǔn)品母液;分別移取各標(biāo)準(zhǔn)品母液適量,加 50%乙腈水稀釋至 50 ng/mL,混勻,備用。

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1.3 分析條件

UHPLC 條件:

色譜柱:Shim-pack GIST Amide(3μm,2.1×100 mm;P/N:227-30818-04)

流速:0.5 mL/min;

進(jìn)樣量:1 μL

柱溫:40 ℃

流動(dòng)相A:0.05 %甲酸水溶液

           B:乙腈


梯度洗脫程序如下:

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質(zhì)譜條件:

離子化模式:ESI,正離子掃描; 

掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)

碰撞氣:氬氣 

加熱氣:干燥空氣 10 L/min

霧化氣:氮?dú)?3 L/min 

干燥氣:氮?dú)?10 L/min

接口溫度:300℃ DL 

溫度:150 ℃

加熱模塊溫度:400 ℃


MRM 參數(shù)見下表

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

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21 種氨基酸+γ-氨基丁酸混標(biāo)溶液 MRM 譜圖(濃度:50 ng/mL)

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結(jié)論

本文建立了21 種氨基酸非衍生法的LC-MS/MS 測(cè)定方法。21 種常見的氨基酸不進(jìn)行衍生,直接采用Shim-pack GIST Amide 色譜柱進(jìn)行分離,島津串聯(lián)質(zhì)譜LCMS-8050 檢測(cè)分析,21 種氨基酸保留強(qiáng),峰型對(duì)稱,且亮氨酸和異亮氨酸完全基線分離。該方法為 21 種氨基酸非衍生法測(cè)定提供參考。

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