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羊外周血淋巴細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2016/1/18閱讀:740
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名稱(chēng)

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

A

羊外周血淋巴細(xì)胞分離液

 

200ml

B

樣本稀釋液(贈(zèng)品)

2010C1119

200ml

C

清洗液(贈(zèng)品)

2010X1118

200ml

D

說(shuō)明書(shū)

 

 

羊外周血淋巴細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A.適用儀器
zui大離心力可達(dá)1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B.耗材

 

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)地

15ml離心管散裝

339650

美國(guó)  NUNC

15ml離心管架裝

339651

美國(guó)  NUNC

50ml離心管散裝

339652

美國(guó)  NUNC

50ml離心管架裝

339653

美國(guó)  NUNC

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

羊外周血淋巴細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。
首先取抗凝血按體積比 1:1的比例與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號(hào):2010C1119)混勻,根據(jù)
稀釋后的樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:稀釋后的血液樣本量小于 5ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支15ml離心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液(注:分離液zui少不得少于  3ml)。
2.用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min(注:
根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離
心條件需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
3.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴
細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一15ml離心管中,往所得離心管中
加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。
5. 250g,離心 10min。
6.棄上清。
7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
8. 250g,離心 10min。
9.重復(fù)67、8,棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
情況 B:稀釋后的血液樣本量大于等于5ml時(shí),實(shí)驗(yàn)方法如下:
1.取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液。
2.將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上,550-650g(zui大離心力可至1000g),
離心20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
時(shí)間越長(zhǎng),具體離心條件需客戶(hù)自行摸索,以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后,樣
本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二)。
3.剩余步驟同情況A”中步驟 3至步驟  9。
【注意事項(xiàng)】
1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui
好在取血 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),血液存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò)6h
分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離
心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
3.吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒
細(xì)胞數(shù)量增加。
4.吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
5.如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)上海研謹(jǐn)生物以尋求幫助。
羊外周血淋巴細(xì)胞分離液說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】
18-25保存,有效期 2年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于80%。

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