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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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jembio DNA連接酶說明書
DNA連接酶（大腸桿菌）
DNA 連接酶（大腸桿菌）催化雙鏈 DNA 中并列的 5' 磷酸和 3' 羥基粘性末端之間形成磷酸二酯鍵。
描述：
• 催化具有粘性末端的雙鏈 DNA 片段之間形成磷酸二酯鍵。
• 5'-磷酰基與相鄰的 3'-羥基的縮合伴隨著 NAD+ 的水解。
• 適用于全長(zhǎng)cDNA（1、2）的高效克隆。
單位定義：一個(gè)單位定義為產(chǎn)生 50% 的 λ DNA 的 Hind III 片段連接所需的酶量。
在 20 µl DNA 末端濃度為 0.02 µM (50 µg/ml) 的測(cè)定混合物中在 16oC 下孵育。
儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于-20oC。
反應(yīng)緩沖液：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、1 mM 二硫蘇糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。
最佳連接發(fā)生在 16°C。
儲(chǔ)存緩沖液：10 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 7.4）、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸銨、1 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油。
質(zhì)量控制：所有制備物都經(jīng)過了內(nèi)切核酸酶和外切酶活性的污染測(cè)試，以及連接反應(yīng)中的功能測(cè)試。
連接分析條件：30 mM Tris-HCl（22°C 時(shí) pH 8.0）、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫蘇糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 λ DNA 的 Hind III 片段。在 16°C 下孵育 30 分鐘。
