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clsgmbh不培養(yǎng)的支原體檢測說明書
產(chǎn)品概述
細胞系、細胞組分、生長和冷凍培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)服務(wù)等等。
Mycoplasma testing without c*tion
| 產(chǎn)品編號 | 選項 |
|---|---|
| 900159 | 不培養(yǎng)的支原體檢測 |
| 900159.1 | 培養(yǎng)14天的支原體檢測 |
產(chǎn)品信息“無需培養(yǎng)的支原體檢測”
支原體是小的原核生物，它們太小而無法在顯微鏡下看到，并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會影響細胞系的細胞生長、增殖和形態(tài)，從而可能導(dǎo)致不可靠的實驗結(jié)果。大約 15% 到 35% 的實驗室細胞培養(yǎng)物被支原體污染。因此，建議經(jīng)?？刂埔员ＷC無支原體的環(huán)境。
分析方法
CLS 提供支原體檢測的短期和長期測試。在前者中，樣品在到達后立即進行測試，而在后者中，開始細胞培養(yǎng)并在無抗生素培養(yǎng) 14 天后對細胞進行測試。支原體檢測是使用兩點檢測系統(tǒng)進行的，該系統(tǒng)包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測試劑盒 (Certus)。
比色報告基因測定
該測試是基于細胞的比色測定。在支原體存在的情況下，報告細胞系會誘導(dǎo)信號級聯(lián)反應(yīng)，從而觸發(fā)培養(yǎng)基中的顏色從紅色變?yōu)樗{色。該測定在 96 孔多孔板中進行。在微孔板分光光度計中檢測 620-655 nm 的信號。檢測到所有支原體和膽原體物種，以及細胞培養(yǎng)物中的其他污染物，例如細菌。結(jié)果顯示在下面的條形圖中：
等溫擴增
等溫擴增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫擴增與使用 DNA 嵌入染料的實時檢測相結(jié)合的快速且可靠的測試。該測定法可以檢測出占污染 >95% 的六種常見的物種：口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發(fā)酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性，還將檢測到其他支原體物種（肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體）。為了確定樣品是支原體陽性還是陰性，需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結(jié)果如下所示：
| 出色地 | 顏色 | 樣品名稱 | 溫度 (°C) | 結(jié)果 |
| 1 | 紫色的 | 樣本 | 94,65 | 消極的 |
| 2 | 粉色的 | 陽性對照 | 87,37 | 積極的 |
| 3 | 綠松石 | 陰性對照 | 94,16 | 消極的 |
等溫擴增結(jié)果的評估
所有熔化溫度及其各自的測試結(jié)果解釋如下：
| 樣本 | 以°C為單位的熔化溫度（Tm） |
| 負控（NC）/內(nèi)控（IC） | 94.8 +/- 0.2 |
| 陽性對照 (PC) | 87.9 +/- 0.2 |
| 支原體陽性 - 支原體DNA擴增 | 87.0 - 89.2 |
| 支原體陽性 - 被少量支原體污染；支原體 DNA 的擴增和內(nèi)部對照 | 87.0 - 89.2 和 95.0 +/- 0.2 |
| 支原體陰性 - 擴大內(nèi)部控制 | 95.0 +/- 0.2 |
| 被其他細菌污染或非特異性 | 89.5 - 94.0 |
比色報告分析結(jié)果的評估
如果測試呈陽性，則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內(nèi)的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類的 CFU/ml 詳細列表如下所示：
| 支原體種類 | 靈敏度 CFU (ml) |
| A.laylawii | 2.5*10 3 |
| M. arginini | 2.0*10 3 |
| 發(fā)酵菌 | 5.0*10 2 |
| M. hyorhinis | 7.0*10 2 |
| 口腔 桿菌 | 5.0*10 5 |
