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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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invitek-molecular 土壤微生物dna提取試劑盒說明書
Instructions for useInvisorb® Spin Soil DNA Kit
該產(chǎn)品用于使用旋轉(zhuǎn)柱技術(shù)手動(dòng)分離土壤樣品中微生物的DNA。
用戶實(shí)驗(yàn)室設(shè)備提供的試劑和設(shè)備：
•微型離心機(jī)（所有方案均通過5415 D Eppendorf離心機(jī)驗(yàn)證）
•可選：離心15或50 ml
•熱振動(dòng)器（37°C-95°C）
•量筒（250 ml）
•一次性手套
•移液管和移液管尖
•渦流混合器
•反應(yīng)管（1.5 ml、2.0 ml）
液體和溶劑：
•DNase/RNase游離水
•96-100%乙醇（非變性）
•異丙醇*
*用2-丙醇驗(yàn)證試劑盒；Carl Roth的Rotipuran®>99.7%，p.a.，ACS，ISO（訂單號6752）
預(yù)期用途
Invisorb®旋轉(zhuǎn)土壤DNA試劑盒是一種基于旋轉(zhuǎn)柱技術(shù)的核酸提取試劑盒，用于從土壤樣品中分離和純化微生物DNA。相關(guān)的樣品材料，如降解的植物材料或沙子也可用于樣品提取。
該產(chǎn)品僅供專業(yè)人員使用，如實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員、醫(yī)生和受過分子生物學(xué)技術(shù)培訓(xùn)的生物學(xué)家。
純化DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量取決于細(xì)菌含量、樣品來源和儲(chǔ)存。土壤樣品的性質(zhì)和成分差異很大。腐殖酸含量、植物降解產(chǎn)物的比例和許多其他參數(shù)影響微生物組成，從而影響DNA產(chǎn)量。典型產(chǎn)率為1–10µg。
下游應(yīng)用：
分離的核酸的產(chǎn)量和質(zhì)量通常適用于大量分子診斷應(yīng)用，如PCR技術(shù)、微生物組分析（NGS）和雜交方法。下游應(yīng)用應(yīng)根據(jù)各自制造商的規(guī)范進(jìn)行。
原則和程序
1.溶解樣品
土壤樣品在高溫變性條件下在裂解緩沖液P中裂解。
植物或動(dòng)物源的生物材料在室溫下裂解，細(xì)菌細(xì)胞和其他微生物的生物材料通過在90°C下孵育而有效裂解，建議對難以裂解的細(xì)胞（如革蘭氏陽性菌）采用加熱步驟。此外，添加氧化鋯珠以提高裂解效率。
2.去除PCR抑制劑和蛋白質(zhì)消化
裂解后，土壤中存在的DNA降解物質(zhì)和PCR抑制劑被吸附到InviAdsorb基質(zhì)上。InviAdsorb位于預(yù)先填充的安全鎖定管中，必須將裂解液放入其中。結(jié)合的污染物和細(xì)胞碎片通過離心法造粒。上清液含有預(yù)純化的DNA。
將蛋白酶K添加到上清液中以在高溫下消化和降解蛋白質(zhì)。
3.結(jié)合核酸
通過向裂解液中加入結(jié)合緩沖液A，調(diào)節(jié)最佳結(jié)合條件。然后將每種裂解物應(yīng)用于RTA旋轉(zhuǎn)過濾器，并將核酸吸附到膜上。
4.清洗以去除殘留污染物
使用洗滌緩沖液I和洗滌緩沖液II有效地洗滌污染物，同時(shí)核酸仍與膜結(jié)合。
5.洗脫DNA
使用50-100µl洗脫緩沖液從RTA旋轉(zhuǎn)過濾器中洗脫核酸。
