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線性PEI轉染說明書

2015-12-30  閱讀(7839)

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名稱:線性PEI轉染試劑,

化學名: 線性聚乙烯亞胺,

cas號:9002-98-6

分子量:25KD

 

用途:用于轉染核酸到哺乳動物細胞

產品編號:78002qf01  78002qf02  78002qf03

包裝規(guī)格:1 mL / 50 mL / 500 mL

儲存條件:4~8密閉保存,可保持穩(wěn)定至少 12 個月,常溫運輸。 ?

產品概述 線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合 物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣泛適用于常見細胞系,如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1COS-1、COS-7、NIH/3T3 Sf9 等。該試劑即使在有血清存在的情況下, 它仍然能的將核酸導入細胞。 78bio公司提供的 線性PEI轉染試劑具有如下優(yōu)點: *的轉染效率 , 重組蛋白的高表達水平 ,與含血清的培養(yǎng)基相兼容, 低細胞毒性 ,易于操作 ?

質量控制 每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將 eGFP 表達質粒(GeneCopoeia Cat.No. EX-EGFP-Lv01)用 EndoFectinTM-Plus 轉染試劑轉入亞融合狀態(tài)的 HEK-293 細胞,轉染 16 h 后, 超過 95%的細胞表達 eGFP。 ?

注意事項

質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內毒素質粒提取試劑盒)。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度,260 nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度(比值應該在 1.8~2.0 的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測 質粒的完整性。

細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果 細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。 ?

瞬時轉染方法

1. 接種細胞: 轉染前一天,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表 1 所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNAPEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表 1 所示,用 Opti-MEM ITMInvitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙 烯管,例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結果: CO2培養(yǎng)箱中 37下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后zui快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定檢測時間。 ?

 

穩(wěn)定轉染方法

1. 接種細胞: 轉染前一天,用胰酶消化細胞并計數。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表 1 所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表 1 所示,用 Opti-MEM ITMInvitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙 烯管,例如 Falcon  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后,添加?體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結果: CO2培養(yǎng)箱中 37下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后zui快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。

5.轉染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細胞稀釋 10 以上),在 CO2培養(yǎng)箱中 37孵育過一晚。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。 ?

 

特別提醒

1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 COS 細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著 提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞 的匯合度仍為 70~80%

2. 對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng) 基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。

4. 對大多數細胞來而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL EndoFectinTM 試劑都能獲得較高轉染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。

 

訂貨信息

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價格¥

規(guī)格

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78002qf01

線性PEI轉染液

200

1ml

78bio

78002qf02

線性PEI轉染液

800

50ml

78bio

78002qf03

線性PEI轉染液

5500

500ml

78bio

 

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