酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(Enzyme Linked Immunospot Assay,ELlSPOT)是細胞免疫學研究中敏感的檢測方法之一，可以在單細做水平對抗體分泌細胞（ASC）及細胞因子（CK）分泌細胞進行檢測。由于是單細胞水平檢測，ELISPOT 比ELISA和有限稀釋法等具有更高的靈敏性。能從20萬-30萬細胞中檢出1個分泌該蛋白的細胞。并且該方法能夠?qū)乖碳ず蟮幕罴汄炦M行功能性檢測，具有較高的特異性、直觀可信度高，并且易操作，已被廣泛用于分泌CK細胞檢測或ASC測定中，在國內(nèi)外免疫學界獲得了廣泛的應用。

AID EliSpot Reader Classic

酶聯(lián)免疫斑點分析儀

  德國艾迪（AID）是專業(yè)研發(fā)并生產(chǎn)酶聯(lián)斑點分析儀的廠商，在上市酶聯(lián)斑點分析儀，自AID EliSpot Reader上市以來，已經(jīng)有超過1500多家實驗室正在使用AID的EliSpot Reader- 酶聯(lián)免疫斑點分析儀。

  AID EliSpot Reader硬件和軟件*符合歐盟CE 認證，F(xiàn)DA 21CFR part11規(guī)范、GMP/GLP標準。

AID EliSpot Reader Classic 主要配置：

• 德國制造高分辨率科研級別相機，彩色CCD芯片，清晰捕捉微小斑點

• QuadPack高精度電動載物臺：全自動控制，位移，各孔自動居中

• LED環(huán)形無影照明光源：照射均勻，可清晰分辨因孔側(cè)壁反光造成的幻影現(xiàn)象，準確識別孔底邊緣

• 專業(yè)水準的電動光學鏡頭：鏡頭自動聚焦，自動曝光調(diào)節(jié)，保證清晰捕捉微小斑點

• 獨立高配置計算機系統(tǒng)：與分析儀獨立，有效減少故障率，預裝正版Win7及Office軟件等

• ELISPOT軟件：全自動讀板，自動計數(shù)分析；同步完成斑點圖像掃描、斑點計數(shù)與結(jié)果分析；

AID EliSpot Reader 軟件功能：

斑點圖像采集與計數(shù)：

全自動讀板，自動采集各孔圖像；

自動計算斑點數(shù)量和斑點相關(guān)信息如大小、面積、光密度等。

內(nèi)置不同因子參數(shù)設置，直接調(diào)用；

CountAID 功能協(xié)助優(yōu)化讀數(shù)參數(shù)，并具有智能參數(shù)記憶功能。

結(jié)果分析：

直接判斷陰陽性檢測結(jié)果；

診斷模塊AIDiagnostic，適用于臨床診斷用ELISPOT實驗的結(jié)果判讀，單獨輸出每例病人斑點圖像和結(jié)果報告；

統(tǒng)計分析各孔斑點分布、對比免疫反應強弱、細胞因子分泌量化比較等。

數(shù)據(jù)輸出與質(zhì)控：

可輸出單孔圖像、任意孔及整板圖像；

多種保存格式，Excel, Txt, PPT等；

輸出數(shù)據(jù)可自定義包含斑點數(shù),SFU,光密度強度, Activities，斑點分布圖表等；

包含質(zhì)控模塊，操作歷史自動記錄，符合GLP規(guī)范。

AID iSpot Reader熒光

（可見光/熒光雙重檢測功能的ELISPOT分析儀）

AID iSpot Reader 主要配置：

• 德國制造光學系統(tǒng)高分辨率科研級別相機，彩色CCD芯片，高品質(zhì)成像，保證微小斑點及斑點暈的識別

• 專業(yè)水準的電動光學鏡頭：鏡頭自動對焦，自動曝光調(diào)節(jié)，保證清晰捕捉微小斑點

• 熒光照明系統(tǒng)：高能氙燈，激發(fā)效率高，波譜范圍廣250-1000nm，是適合熒光成像的激發(fā)光源

• 4-8位濾光片輪，全自動切換，至少標配FITC和Cy3熒光濾光片，其他波長可加配

• 獨立高配計算機系統(tǒng)：與分析儀獨立有效減少故障率，配置實時更新

• ELISPOT軟件：全自動讀板，自動計數(shù)分析；自動疊加不同熒光通道圖像，找出共染色斑點（共分泌細胞）

AID iSpot Reader 軟件功能及技術(shù)*性：

熒光圖像Overlay技術(shù)保證多色因子共分泌斑點準確識別， 避免酶標雙色檢測中因不同細胞因子分泌量不均而引起的誤判

全自動判讀：iSpot對板上每孔的各種顏色熒光斑點分別成像，例如 檢測FITC標記的IFN-γ分泌情況和Cy3標記的IL-2分泌情況，軟件再自行將不同熒光圖像疊加（Overlay），準確識別共分泌（IFN-γ&IL-2）細胞。整個過程全自動，無需人工干預；

性能穩(wěn)定, 兼容擴展性好：高能激發(fā)保證微弱熒光信號檢測，窄帶濾光片保證特異性信號檢測，多色擴展只需加配濾光片；

技術(shù)*性：早在上市酶聯(lián)斑點分析儀，1996年發(fā)明《應用Elispot方法檢測血液細胞活性》；擁有《以熒光濾光片為基礎進行熒光多色ELISPOT的檢測系統(tǒng)》的PCT/EP2008/009112‐FluoroAID；

學術(shù)發(fā)表性：從熒光款2007年上市到現(xiàn)在，80% 熒光EliSpot應用SCI文獻是由 發(fā)表的，被*作熒光檢測的選擇 ；

認可度高：與牛津大學Oxford免疫學實驗室密切合作開發(fā)是其用于結(jié)核的酶聯(lián)斑點(T-Spot)診斷的工具；艾滋病、疫苗行動組織（IAVI）品牌；Elispot試劑盒開發(fā)實驗室（如瑞典Mabtech）品牌。

Applications - 熒光ELISPOT應用文獻 :

Nature Medicine. 2013 Oct;19(10):1305-13. Cellular immune correlates of protection against symptomatic pandemic influenza.Saranya Sridhar, &Ajit Lalvani,et al.

Infection, 2014 Jan. IGRA-positive patients and interferon-gamma/interleukin-2 signatures: Can the FluoroSpot assay provide further information? P. Bittel, et al.

Journal of internal medicine, 2013. Decreased functional T lymphocyte-mediated cytokine response in patients withchemotherapy-induced neutropenia. Öhrmalm L., et al.

Methods Mol Biol. 2012;792:77-85. Dual- and triple-color fluorospot. Ahlborg N, Axelsson B.

ELISPOT 應用領(lǐng)域(Application):

免疫學基礎研究：T細胞和B細胞，Th0/Th1/Th2細胞轉(zhuǎn)換分析

疫苗研究：ELISPOT是檢測和評價疫苗的細胞免疫的有效方法。上普遍采用ELISPOT方法監(jiān)測HIV疫苗研究中的免疫應答反應，在艾滋病疫苗行動計劃中，采用ELISPOT法對T細胞功能進行評價。

藥物篩選：化合物和藥物免疫學反應的篩選感染性疾病診斷與研究：例如結(jié)核病的臨床診斷，萊姆病、艾滋病等傳染病的研究

腫瘤免疫研究：已用于分析和評價在癌癥病人中誘導腫瘤特異的T細胞的疫苗試驗。治療前后特異性細胞免疫應答水平的檢測，可有效的評估治療效果，對于治療和用藥提供重要的參考信息。

自身免疫病研究：調(diào)整機體免疫調(diào)節(jié)功能，對自身免疫病的治療揭供更有效的措施

過敏研究：參與過敏機制的細胞因子研究，如IL-4

移植免疫研究：移植中排斥反應的預測