M199基礎培養(yǎng)基的配制步驟

M199基礎培養(yǎng)基是 Morgan 等在 1950 年zui早開發(fā)的一種化學成份明確的基礎培養(yǎng)基，zui早用于雞胚心細胞的培養(yǎng)。目前在補充了血清后可用于病毒及疫苗的生產(chǎn)，也用于多種非轉(zhuǎn)化的動物細胞生長。  

高壓滅菌型是該培養(yǎng)基的熱穩(wěn)定配方，可保證其營養(yǎng)成份在高壓高熱中不受影響。該配方中不含L-谷氨酰胺及碳酸氫鈉，需在高溫滅菌后添加。  

產(chǎn)品型號  

M199基礎培養(yǎng)基，含 L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基，不含 L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基，含 L-谷氨酰胺，含 HEPES，不含碳酸氫鈉  

M199基礎培養(yǎng)基，含 L-谷氨酰胺，含 HEPES,不含碳酸氫鈉,含 Hank 鹽  

M199 基礎培養(yǎng)基，含 L-谷氨酰胺，不含酚紅，不含碳酸氫鈉  

M199 基礎培養(yǎng)基，高壓滅菌型，不含 L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉  

產(chǎn)品規(guī)格  

干粉（1L、10L 及 100L)； 液體（500 ml)  配制方法  

干粉培養(yǎng)基的過濾配制  

1. 將 1 升量的干粉在 950ml 細胞培養(yǎng)級純凈水中*溶解  
2. 加入 2 克碳酸氫鈉，繼續(xù)攪拌至*溶解  
3. 用 1N 鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整到要求的 pH，將溶液定溶至 1000ml  
4. 在超凈臺內(nèi)用 0.22um 濾膜正壓過濾  
5. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

高壓滅菌型的配制  

1. 將 1 升量的高壓滅菌型干粉在 900ml 細胞培養(yǎng)級純凈水中*溶解  
2. 將溶液 pH 調(diào)至 4.0，并將溶液定溶至 960ml  
3. 在 121℃、15psi 高壓消毒 5 分鐘  
4. 將培養(yǎng)基迅速取出，避免過久加熱引起成份分解或液體蒸發(fā)減少  
5. 待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，無菌操作加入 29.3ml 的無菌 7.5%碳酸氫鈉溶液，及 10ml 的無菌 200mM L-谷氨酰胺  
6. 如有必要，用無菌的 1N 鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整 pH  
7. 將培養(yǎng)基在 2~8℃避光保存  

自備材料  

細胞培養(yǎng)級或注射級純水  

7.5%碳酸氫鈉溶液（無菌）  

200mM 谷氨酰胺溶液（無菌)  

1 N 鹽酸溶液（無菌)  

1 N 氫氧化鈉溶液（無菌)  

質(zhì)檢指標  

形狀：淡黃色均勻粉末（干粉），澄清透明（液體）  

溶解：干粉按要求溶解后澄清透明  

pH 值：（加碳酸氫鈉前）4.4-5.0（加碳酸氫鈉后）(液體）7.4-8.0  

滲透壓：（加碳酸氫鈉前）230-270（加碳酸氫鈉后）(液體）280-  320  

菌落：每克小于 100cfu (干粉），無菌（液體）  

細胞生長：正常（干粉及液體）  

儲存及注意事項  

1. 所有液體及干粉培養(yǎng)基應在 2~8℃避光保存，并在有效期內(nèi)使用。  
2. 不建議配制培養(yǎng)基濃縮液。部分氨基酸或鹽會在高濃度下不溶解或沉淀。 
3. 液體培養(yǎng)基的 pH 儲存時會因為二氧化碳的逃逸而發(fā)生改變。建議盡量減少開瓶次數(shù)。  
4. 滅菌后的液體培養(yǎng)基添加物應無菌，并在無菌操作下添加。  
5. 干粉培養(yǎng)基吸濕性強，極易吸水變質(zhì)。包裝打開后應全部使用或剩余舍棄。  

注意：本產(chǎn)品于研發(fā)生產(chǎn)使用