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WB-0071-RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液（中）
WB-0071-RIPA 組織 / 細(xì)胞裂解液（中）

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更新時(shí)間：2024/11/27 8:46:38

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RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
注意事項(xiàng) ： 1．為獲得Z佳的實(shí)驗(yàn)效果，可適當(dāng)分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。 2．PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。 3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。 4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為


詳細(xì)介紹
品名編號(hào)規(guī)格價(jià)格 
RIPA裂解液WB-007150ml80 

使用說(shuō)明 ：

1．培養(yǎng)細(xì)胞
      取出裂解液，待融化后顛倒混勻數(shù)次，適量分裝凍存。在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其zui終濃度為1mM）混勻，立即使用。

 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒(méi)有干擾，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞數(shù)秒后細(xì)胞就會(huì)被裂解。

懸浮細(xì)胞：收集培養(yǎng)細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒(méi)有干擾，也可以不洗)，用手指把細(xì)胞用力彈散，按6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果細(xì)胞數(shù)量較大，應(yīng)按50-100萬(wàn)細(xì)胞/管分裝或根據(jù)細(xì)胞數(shù)量按比例增加裂解液。用手指輕彈管底以促進(jìn)裂解液和細(xì)胞充分接觸，裂解*時(shí)應(yīng)無(wú)明顯的細(xì)胞顆粒。

裂解物經(jīng)10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。

 2．組織樣品 
      取Ep管，分別稱重標(biāo)記，把組織剪切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不*，可以適當(dāng)增加用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當(dāng)減少用量)。用手握式電動(dòng)組織細(xì)胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    如果組織樣品本身非常細(xì)小，如淋巴細(xì)胞，可直接加入裂解液，通過(guò)振蕩（Vortex）以使樣品裂解*。

保存條件：
     PMSF需－20℃保存，裂解液若經(jīng)常使用，可于4℃保存至少三個(gè)月。若長(zhǎng)期保存，建議置于－20℃。

注意事項(xiàng) ：
 1．為獲得*的實(shí)驗(yàn)效果，可適當(dāng)分裝使用，以盡量避免反復(fù)凍融。 
 2．PMSF應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)加。 
 3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。 
 4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請(qǐng)立即用流水沖洗，再向醫(yī)療保健結(jié)構(gòu)咨詢。
包裝清單： 

RIPA裂解液50ml（－20℃保存）
PMSF（100X）550ul（－20℃保存）
使用說(shuō)明書               1份

              

 

 

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