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技術(shù)文章

磷酸鹽緩沖液的配制方法

閱讀:1130          發(fā)布時(shí)間:2013-6-14

磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline,簡(jiǎn)稱PBS)的是常用于生物學(xué)研究的一個(gè)緩沖溶液。PBS可以為三種溶液的英文縮寫,分別是磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution)、磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline)及 磷酸鹽緩沖鈉(phosphate buffered sodium),其配制方法不同,pH值不同,發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不*相同。

磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法:

稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,zui后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌(至少20分鐘),保存存于室溫或4℃冰箱中。需要注意的是,通常所說(shuō)的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,而非Na 離子或K 離子的濃度,Na 離子和K 離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話,則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。
 PH            7.6      7.4         7.2        7.0
H2O       1000     1000     1000     1000
NaCl         8.5      8.5        8.5         8.5
Na2HPO4 2.2      2.2       2.2         2.2
NaH2PO4 0.1      0.2       0.3         0.4

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看,新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間,可是在溫度的影響下,尤其在夏天,其電離常數(shù)發(fā)生了改變,在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后,PH值會(huì)明顯改變(我親自測(cè)過(guò)偏酸)。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了,PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣,要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。每次使用前用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的PBS,如果發(fā)生偏酸或偏堿,注意重新?lián)Q新液。

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