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技術(shù)文章

細胞凋亡的檢測方法

閱讀:1307          發(fā)布時間:2013-7-12

 細胞凋亡也就是實驗中常說的程序性細胞死亡,它是一種不同于壞死的由基因調(diào)控的細胞主動性死亡過程,是細胞在一定的生理或病理狀態(tài)下,遵循自身的程序,自己結(jié)束自己生命的過程,zui后細胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體,而被其他細胞吞噬。

檢測細胞凋亡的方法:

 

光學(xué)顯微鏡檢查:

細胞涂片或組織切片在PAS或HE染色后,即可在油鏡下觀察,若同時進行細胞免疫組化研究,則可判別AP細胞種類。

判斷標(biāo)準:

①散在單個細胞。

②細胞體積縮小。

③輪廓清楚,常有一環(huán)形的空白區(qū),胞漿嗜酸性。

④核濃縮,邊聚碎裂呈分散的嗜堿性塊。

⑤胞內(nèi)凋亡小體。

⑥無炎癥反應(yīng)。

電子顯微鏡檢查 

電鏡是觀察細胞形態(tài)的方法。細胞核和細胞器亞微結(jié)構(gòu)清晰易辨,尤其是電子顯微鏡與數(shù)字圖形處理系統(tǒng)結(jié)合可觀察到超微結(jié)構(gòu)更細微的變化。雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡zui經(jīng)典、zui可靠的方法,被認為是確定細胞凋亡的金標(biāo)準。Ap過程的重要變化是細胞染色體的碎片狀分解,細胞器變化和生物膜呈空泡狀。電鏡標(biāo)本的制備同常規(guī)處理,電鏡下可見Ap細胞體積縮小,小體積細胞比例增高。細胞表面纖毛喪失,細胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開始固縮,電子密度升高。在初期細胞器仍保持完整。掃描電鏡下Ab小體的表面生物膜形成大量氣泡和空泡,呈沸騰狀和凹陷狀變化;透射電鏡下則呈圓形結(jié)構(gòu),內(nèi)含多個或整個細胞器,也可含一部分細胞核。

 

 

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