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上海巴玖 談如何選擇倒置顯微鏡與熒光顯微鏡
在細(xì)胞培養(yǎng)及相關(guān)衍生實(shí)驗(yàn)中，顯微鏡是一個(gè)很重要的儀器。目前，市場(chǎng)上有各種類型的顯微鏡，選擇一款符合需求又適用的顯微鏡是一個(gè)挑戰(zhàn)，下面為大家介紹倒置顯微鏡和熒光顯微鏡的原理，便于大家選擇。
倒置顯微鏡組成和普通顯微鏡一樣，主要包括三部分：機(jī)械部分、照明部分、光學(xué)部分。 倒置顯微鏡組成和普通正置顯微鏡一樣，只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺(tái)之下，后者在載物臺(tái)之上。 這樣的構(gòu)造使得照明聚光系統(tǒng)與載物臺(tái)的有效距離可以顯著擴(kuò)大，便于放置培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等較厚的待觀察器具（當(dāng)然載玻片等也可以），而同時(shí)物鏡與材料之間的工作距離不必很大。 倒置顯微鏡供醫(yī)療衛(wèi)生單位、高等院校、研究所用于微生物、細(xì)胞、細(xì)菌、組織培養(yǎng)、懸浮體、沉淀物等的觀察，可連續(xù)觀察細(xì)胞、細(xì)菌等在培養(yǎng)液中繁殖分裂的過程，并可將此過程中的任一形態(tài)拍攝下來。 在細(xì)胞學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、遺傳工程學(xué)、工業(yè)微生物學(xué)、植物學(xué)等領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛。
熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 對(duì)被檢物體來說，熒光產(chǎn)生方式有兩種：自發(fā)熒光，經(jīng)過紫外照射直接發(fā)出熒光；繼發(fā)熒光，被觀察物體經(jīng)過熒光染料處理之后，經(jīng)過紫外光照射才能發(fā)出熒光。 細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后產(chǎn)生自發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)出繼發(fā)熒光。 熒光顯微鏡利用一個(gè)高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光（紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm）作為激發(fā)光、激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。 這樣在強(qiáng)烈的對(duì)襯背景下，即使熒光很微弱也易辨認(rèn)，敏感性高，主要用于細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究。
熒光顯微鏡分為透射式和落射式兩類，前者較為原始，后者較為*。 兩類熒光顯微鏡的基本構(gòu)建相似，主要區(qū)別為：透射式的激發(fā)光透過標(biāo)本，標(biāo)本整體產(chǎn)生熒光，熒光再進(jìn)入物鏡，放大倍數(shù)越高，熒光越弱；落射式的激發(fā)光投射在標(biāo)本表面，標(biāo)本表面產(chǎn)生熒光，熒光再進(jìn)入物鏡，放大倍數(shù)越高，熒光越強(qiáng)，適于進(jìn)行高倍觀察。 熒光顯微鏡主要構(gòu)件有汞燈光源、激發(fā)濾板、分色鏡（落射式）、壓制濾板、暗場(chǎng)聚光鏡（透射式）等。此外，由于汞燈發(fā)熱嚴(yán)重，大多還裝有吸熱濾鏡。 部分熒光顯微鏡還有相差物鏡和環(huán)狀光闌，因此可以進(jìn)行相差觀察。 還有的熒光顯微鏡采取倒置構(gòu)架，又是倒置顯微鏡，等等。
此外，上述顯微鏡都可以通過安裝CCD組裝成數(shù)碼顯微鏡，它是將顯微鏡看到的實(shí)物圖像通過數(shù)模轉(zhuǎn)換，使其成像在計(jì)算機(jī)上。 從而，我們可以對(duì)微觀領(lǐng)域的研究從傳統(tǒng)的普通的雙眼觀察到通過顯示器上再現(xiàn)，從而提高了工作效率。
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