Celltechgen CTG-MGN4766說(shuō)明書(shū)

Screening Kit

• Model: CTG-MGN4766

細(xì)節(jié)：

- 篩選套件

貨號(hào)：CTG-MGN4766

試劑盒組分：

2毫升 - 磁珠與單克隆抗體結(jié)合 - 。

200μl-單克隆抗體，R-PE共軛（用于檢測(cè)）

描述

該試劑盒用于使用磁珠磁性標(biāo)記來(lái)消耗 - ⁺細(xì)胞。細(xì)胞用 - 磁珠標(biāo)記并施加到磁柱上，收集流過(guò)部分中的耗盡細(xì)胞用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。篩選步驟可在細(xì)胞擴(kuò)增后再次進(jìn)行。

目標(biāo)特征

符號(hào)： -

基因編號(hào)：729816

Uniprot條目：Q04683

蛋白質(zhì)名稱(chēng)：CXC趨化因子受體5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體1同源物）（CD抗原CD185）Mus musculus（Mouse）

目標(biāo)功能

容量        

1 X 10 ^9個(gè)細(xì)胞

公式  

所有組分均以含有穩(wěn)定劑和0.05％sodium azide的緩沖液供應(yīng)。

存儲(chǔ)和使用      

在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結(jié)。到期日期顯示在樣品瓶標(biāo)簽上。該產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于診斷程序。

一般議定書(shū)

提供篩選珠粒以用突變的細(xì)胞表面抗原分離靶細(xì)胞或用特異性抗原消耗非靶細(xì)胞。篩選程序通過(guò)用針對(duì)細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體磁珠間接磁性標(biāo)記細(xì)胞（突變或特異于非靶細(xì)胞）進(jìn)行，然后通過(guò)柱分離標(biāo)記的細(xì)胞和靶細(xì)胞。收集流出部分以進(jìn)行進(jìn)一步分析。

1.樣品制備

• 當(dāng)使用抗凝外周血或血沉棕黃層時(shí)，應(yīng)通過(guò)密度梯度離心分離外周血單核細(xì)胞（PBMC）。
• 為了在密度梯度分離后除去血小板，將細(xì)胞沉淀重懸于緩沖液中，并在20℃下以200×g離心10-15分鐘。小心吸出上清液。重復(fù)洗滌步驟。
• 使用組織或裂解的血液時(shí)，使用標(biāo)準(zhǔn)方法制備單細(xì)胞懸液。
• 死細(xì)胞可以非特異性結(jié)合磁珠。為了去除死細(xì)胞，我們建議使用密度梯度離心或死細(xì)胞去除試劑盒。
• 保持細(xì)胞冷卻，并使用預(yù)先冷卻的溶液。

2.磁性標(biāo)簽

• 以下給出的磁性標(biāo)簽卷多可達(dá)10個(gè)？總細(xì)胞。工作時(shí)少于10？細(xì)胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細(xì)胞數(shù)時(shí)，相應(yīng)地?cái)U(kuò)大所有試劑體積和總體積。
• 應(yīng)滴定初級(jí)染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應(yīng)該增加陰性群體的熒光強(qiáng)度。

1）     計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。

2）     以300×g離心細(xì)胞懸浮液10分鐘。*吸出上清液。

3）     每10 ^7個(gè)總細(xì)胞將細(xì)胞重懸于80μL緩沖液中。注意：等分適量的細(xì)胞用于抗體-R-PE標(biāo)記和檢測(cè)。

4）     每10小時(shí)加入20μL抗細(xì)胞表面抗原磁珠?？偧?xì)胞。

5）充分混合，在2-8℃下孵育15分鐘。

6）每10小時(shí)加入1-2 mL緩沖液洗滌細(xì)胞？將細(xì)胞以300×g離心10分鐘。

7）*吸出上清液。

8）重新懸掛10？細(xì)胞在500μL緩沖液中。注意：對(duì)于更高的單元格數(shù)，請(qǐng)相應(yīng)地?cái)U(kuò)大緩沖區(qū)容量。

9）繼續(xù)磁分離。

3.篩選靶細(xì)胞

1）    將色譜柱放在合適的分離器的磁場(chǎng)中。

2）    用2 mL緩沖液沖洗制備色譜柱。

3）    將細(xì)胞懸浮液施加到柱上。

4）    收集未標(biāo)記的細(xì)胞，其通過(guò)并用2×1mL緩沖液洗滌柱。一旦柱貯存器為空，則通過(guò)連續(xù)添加緩沖液來(lái)執(zhí)行洗滌步驟。收集總排出物。其含有未標(biāo)記的預(yù)富集漿細(xì)胞部分。

5）    通過(guò)以300×g離心10分鐘收集流出級(jí)分中的靶細(xì)胞，小心吸出上清液。

6）    將未接觸的細(xì)胞重懸于培養(yǎng)基或所需的緩沖液中用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

7）    等分適當(dāng)量的細(xì)胞用于抗體-R-PE標(biāo)記和檢測(cè)是否有足夠的細(xì)胞，否則，在細(xì)胞擴(kuò)增后進(jìn)行抗體-R-PE標(biāo)記和檢測(cè)。

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