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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司資料大小
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530次swant 6B3說明書
產(chǎn)品:小鼠抗鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體(單克?。?/span>
代碼:6B3
批號(hào):010399
形式:凍干濃縮上清液(不含防腐劑)。
數(shù)量:500µl。
復(fù)溶:用500µl雙蒸餾水。
用重組人calretinin-22k免疫小鼠產(chǎn)生抗calretinin的抗體6B3[1,2]。鈣視網(wǎng)膜蛋白22k是鈣視網(wǎng)膜蛋白基因的選擇性剪接產(chǎn)物(3),與鈣視網(wǎng)膜蛋白相同,可達(dá)Arg178。融合后以人重組鈣視網(wǎng)膜蛋白為靶標(biāo)篩選雜交瘤細(xì)胞,篩選克隆6B3??贵w6B3識(shí)別鈣視網(wǎng)膜蛋白和鈣視網(wǎng)膜蛋白-22k共有的前4個(gè)EF手結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位(2)。評(píng)價(jià)其特異性和效價(jià):a)通過生物素-抗生物素蛋白標(biāo)記4%多聚甲醛(或10%福爾馬林緩沖液)固定的冷凍、振動(dòng)和石蠟切片,b)通過免疫印跡的免疫酶標(biāo)記,c)通過組織鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)(6)
該產(chǎn)品是針對(duì)鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)蛋白相關(guān)的EF手家族鈣結(jié)合蛋白calretinin(4)的單克隆抗體。該抗體與不同種屬組織中的鈣視網(wǎng)膜蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)(見免疫印跡)。該抗體不與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),通過其在腦中的分布以及免疫印跡測(cè)定。Calretinin是一種有吸引力的神經(jīng)解剖學(xué)工具,這種McAB保證了抗Calretinin抗體持續(xù)產(chǎn)生具有相同特異性和化學(xué)同一性的恒定滴度。該抗體可識(shí)別人間皮瘤中的鈣視網(wǎng)膜蛋白(4,5)。
復(fù)溶后,以小份(例如1µl)冷凍并保持在-80 ℃(或至少-20 ℃)。連續(xù)使用時(shí),保持在4 ℃(含0.01%疊氮化納)。避免反復(fù)凍融。
腦提取物的免疫印跡
抗體6B3可特異性染色腦提取物免疫印跡上的鈣視網(wǎng)膜蛋白條帶(圖1)。
1 2 3 4 5 6 7
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圖1單克隆抗體6B3免疫印跡各種屬腦勻漿。 1:小鼠;2:大鼠;3:豚鼠;4:兔;5:食蟹猴;6:斑馬魚;7:雞。在所有種屬中,在29 kDa處檢測(cè)到條帶。 |
鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)
抗體6B3免疫標(biāo)記正常大腦中的神經(jīng)元亞群,具有高效率(圖2a),但不染色鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的大腦(圖2b)。
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圖2a:對(duì)照小鼠大腦皮層McAB 6B3的免疫組織化學(xué)染色。注意上層散在中間神經(jīng)元的強(qiáng)染色(箭頭)。×100 | 圖2b:在calretini基因敲除小鼠的大腦皮層中不存在McAB 6B3的特異性免疫組織化學(xué)染色(5)。抗小鼠二抗引起的血管壁非特異性染色(星號(hào))。×100 |
免疫組織化學(xué):當(dāng)在冷凍切片機(jī)或多聚甲醛(4%)或福爾馬林固定組織的石蠟切片上進(jìn)行時(shí),為1:2'000-1:5'000。
免疫印跡:1:1'000-1:2'000。
對(duì)于免疫組織化學(xué)和免疫印跡,采用抗生物素蛋白-生物素法測(cè)定滴度。我們建議通過滴定實(shí)驗(yàn)確定宜稀釋度
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