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swant 6B3說明書

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swant 6B3說明書

產(chǎn)品:小鼠抗鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體(單克?。?/span>

 

代碼:6B3

 

批號(hào):010399

 

形式:凍干濃縮上清液(不含防腐劑)。

 

數(shù)量:500µl。

 

復(fù)溶:用500µl雙蒸餾水。

 

描述:

用重組人calretinin-22k免疫小鼠產(chǎn)生抗calretinin的抗體6B3[1,2]。鈣視網(wǎng)膜蛋白22k是鈣視網(wǎng)膜蛋白基因的選擇性剪接產(chǎn)物(3),與鈣視網(wǎng)膜蛋白相同,可達(dá)Arg178。融合后以人重組鈣視網(wǎng)膜蛋白為靶標(biāo)篩選雜交瘤細(xì)胞,篩選克隆6B3??贵w6B3識(shí)別鈣視網(wǎng)膜蛋白和鈣視網(wǎng)膜蛋白-22k共有的前4個(gè)EF手結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位(2)。評(píng)價(jià)其特異性和效價(jià):a)通過生物素-抗生物素蛋白標(biāo)記4%多聚甲醛(或10%福爾馬林緩沖液)固定的冷凍、振動(dòng)和石蠟切片,b)通過免疫印跡的免疫酶標(biāo)記,c)通過組織鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)(6)

該產(chǎn)品是針對(duì)鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)蛋白相關(guān)的EF手家族鈣結(jié)合蛋白calretinin(4)的單克隆抗體。該抗體與不同種屬組織中的鈣視網(wǎng)膜蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)(見免疫印跡)。該抗體不與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),通過其在腦中的分布以及免疫印跡測(cè)定。Calretinin是一種有吸引力的神經(jīng)解剖學(xué)工具,這種McAB保證了抗Calretinin抗體持續(xù)產(chǎn)生具有相同特異性和化學(xué)同一性的恒定滴度。該抗體可識(shí)別人間皮瘤中的鈣視網(wǎng)膜蛋白(4,5)。

 

儲(chǔ)存條件:

復(fù)溶后,以小份(例如1µl)冷凍并保持在-80 ℃(或至少-20 ℃)。連續(xù)使用時(shí),保持在4 ℃(含0.01%疊氮化納)。避免反復(fù)凍融。

 

 

腦提取物的免疫印跡


 

抗體6B3可特異性染色腦提取物免疫印跡上的鈣視網(wǎng)膜蛋白條帶(圖1)。

 

1 2 3 4 5 6 7

29 kDa

圖1單克隆抗體6B3免疫印跡各種屬腦勻漿。

1:小鼠;2:大鼠;3:豚鼠;4:兔;5:食蟹猴;6:斑馬魚;7:雞。在所有種屬中,在29 kDa處檢測(cè)到條帶。

 

鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)

抗體6B3免疫標(biāo)記正常大腦中的神經(jīng)元亞群,具有高效率(圖2a),但不染色鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的大腦(圖2b)。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

*

圖2a:對(duì)照小鼠大腦皮層McAB 6B3的免疫組織化學(xué)染色。注意上層散在中間神經(jīng)元的強(qiáng)染色(箭頭)。×100

圖2b:在calretini基因敲除小鼠的大腦皮層中不存在McAB 6B3的特異性免疫組織化學(xué)染色(5)。抗小鼠二抗引起的血管壁非特異性染色(星號(hào))。×100

 

工作稀釋液:

免疫組織化學(xué):當(dāng)在冷凍切片機(jī)或多聚甲醛(4%)或福爾馬林固定組織的石蠟切片上進(jìn)行時(shí),為1:2'000-1:5'000。

免疫印跡:1:1'000-1:2'000。

對(duì)于免疫組織化學(xué)和免疫印跡,采用抗生物素蛋白-生物素法測(cè)定滴度。我們建議通過滴定實(shí)驗(yàn)確定稀釋度

 

參考文獻(xiàn)

  1. Schwaller B.,Buchwald P.,Blümcke I.,Celio M.R. and Hunziker W.(1994)Characterization of apolyclonal antiserum against the purified human recombinant calcium-binding protein calretinin.Cell Calcium 14:639-648.
  2. Zimmermann,L. and Schwaller B(2002)單克隆抗體識(shí)別鈣視網(wǎng)膜蛋白的表位。細(xì)胞鈣31:13-25。
  3. Rogers J.H.(1987)Calretinin:一種主要在神經(jīng)元中表達(dá)的新型鈣結(jié)合蛋白的基因。J.細(xì)胞生物學(xué)105:1343-1353.
  4. Gotzos V.、Vogt P.和M.R. Celio(1995)Calretinin是上皮型惡性胸膜間皮瘤的選擇性標(biāo)志物。病理學(xué)研究實(shí)踐192:137-147.
  5. Doglioni,C. et al.(1996)Calretinin:間皮瘤的一種新型免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記物。Am.J. Surg.病理學(xué)。20:1037-1046.
  6. Schiffmann S.N. et al(1999)在缺乏鈣視網(wǎng)膜蛋白的小鼠中運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)和浦肯野細(xì)胞興奮性受損。PNAS,96:5257-5262.

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