1.安裝暗場(chǎng)聚光器：檢查聚光器的光軸是否與顯微鏡的光路一致，通過(guò)中心調(diào)節(jié)旋鈕合軸調(diào)整，使圈錐光束的交點(diǎn)集中到標(biāo)本平面上。

 

2.放置標(biāo)本：在聚光鏡前透鏡與載物片之間必須浸油，以防止來(lái)自標(biāo)本細(xì)節(jié)的反射光和衍射光束在載物玻片表面進(jìn)行全反射，影響觀(guān)察結(jié)果。

 

3.調(diào)節(jié)聚光鏡焦點(diǎn)：操縱光源會(huì)聚透鏡，使圓錐形光束的交點(diǎn)準(zhǔn)確照射到標(biāo)本平面上。

 

4.選擇物鏡：不能使用油浸系或水浸系的物鏡，干燥系物鏡中也要挑選鏡率在0.85以下的物鏡，Zeiss廠(chǎng)出售的本身帶有可調(diào)光欄的物鏡最為適用。

 

5.選擇光源：根據(jù)實(shí)際需求選擇光強(qiáng)合適的光源，如超聚光鏡觀(guān)察膠體微粒運(yùn)動(dòng)時(shí)，光強(qiáng)越大越好。

 

6.浸油方法：聚光鏡與載玻片間浸油時(shí)要特別注意避免氣泡，氣泡會(huì)導(dǎo)致暗視野觀(guān)察效果完全被破壞。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

 

生物學(xué)研究：用于觀(guān)察活細(xì)胞、細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等微生物的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)和分布，以及細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器、纖維等結(jié)構(gòu)，如觀(guān)察細(xì)菌的鞭毛運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程等。

 

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)：在臨床檢驗(yàn)中，可用于檢測(cè)人體體液中的病原體，如血液中的瘧原蟲(chóng)、螺旋體，尿液中的尿管形、結(jié)晶等，有助于疾病的診斷和治療。

 

材料科學(xué)：用于觀(guān)察材料表面的微觀(guān)結(jié)構(gòu)、缺陷和雜質(zhì)，如金屬材料的晶界、半導(dǎo)體材料的位錯(cuò)等，對(duì)材料的性能研究和質(zhì)量控制具有重要意義。

 

膠體化學(xué)：可觀(guān)察膠體粒子的布朗運(yùn)動(dòng)、大小、形狀和分布，研究膠體的穩(wěn)定性、凝聚現(xiàn)象等，為膠體化學(xué)的理論研究和實(shí)際應(yīng)用提供重要依據(jù)。

 

優(yōu)缺點(diǎn)

 

優(yōu)點(diǎn)：可以觀(guān)察到普通顯微鏡難以看清的微小物體和結(jié)構(gòu)，提高了對(duì)微小顆粒的分辨率；無(wú)需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染色處理，避免了染色過(guò)程對(duì)標(biāo)本的損傷和變形，有利于觀(guān)察活細(xì)胞和生物大分子的動(dòng)態(tài)行為；圖像具有較高的對(duì)比度，使物體的輪廓和運(yùn)動(dòng)更加清晰可見(jiàn)。

 

缺點(diǎn)：只能觀(guān)察物體的輪廓和運(yùn)動(dòng)，無(wú)法分辨其微細(xì)結(jié)構(gòu)；需要較強(qiáng)的光源，高亮度的光線(xiàn)可能會(huì)對(duì)某些光敏性標(biāo)本造成損傷；對(duì)樣品的制備和操作要求較高，如樣品必須均勻、透明，且厚度適中，否則會(huì)影響觀(guān)察效果。