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技術(shù)文章

各種轉(zhuǎn)染辦法比擬

閱讀:148          發(fā)布時(shí)間:2016-8-24

ELISA試劑盒細(xì)胞倡議用CSCL梯度離心,轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多 GIBCO BRL ,Promega 陽離子脂質(zhì)體法 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)構(gòu)成復(fù)合物,然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核分離;另一種解釋是經(jīng)過細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃渡過高,中和脂質(zhì)體外表電核,而降低了與細(xì)胞的分離才能) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一切細(xì)胞 運(yùn)用辦法簡單,可攜帶大片段DNA,通用于各品種型的暴露DNA或RNA,能轉(zhuǎn)染各品種型的細(xì)胞,沒有免疫原性。

雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但在體內(nèi),能被血清肅清,并在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)激烈的抗炎反響,招致高程度的毒性,這在很大水平上限制了其應(yīng)用 陽離子聚合物 帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)構(gòu)成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞外表帶負(fù)電的蛋白多糖互相作用,并經(jīng)過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一切細(xì)胞 除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高,操作簡單,適用范圍廣,反復(fù)性好等特性外,還具有在體內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低等特性,是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。

病毒介導(dǎo)法 逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA) 經(jīng)過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞外表的受體互相作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)入酶啟動合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb),細(xì)胞需處團(tuán)結(jié)期,需思索平安要素 中國科學(xué)院典型培育物保藏委員會 腺病毒(雙鏈DNA) 先和細(xì)胞外表的受體分離,繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需思索平安要素 中國科學(xué)院典型培育物保藏委員會 Biolistic 顆粒傳送法 (基因槍粒子轟擊法) 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道安裝投射入細(xì)胞。ELISA試劑盒

DNA在胞內(nèi)逐漸釋放,表達(dá) 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 可用于:人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞 . 顯微注射法 用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞 . 電穿孔法 高脈沖電壓毀壞細(xì)胞膜電位,DNA經(jīng)過膜上構(gòu)成的小孔導(dǎo)入 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一切細(xì)胞 適用性廣,除了質(zhì)粒外,還可轉(zhuǎn)染大的基因組(>65kb)但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大, 需依據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件,拷貝數(shù)較少1-20 .

AATK    AATK細(xì)胞凋亡關(guān)聯(lián)酪氨酸激酶抗體
ABCB5    ATP結(jié)合蛋白家族5抗體
APNG    N-甲基嘌呤DNA糖基化酶
AU5 tag    AU5 tag標(biāo)簽抗體
ATP2c1    鈣離子ATP酶通道蛋白抗體
alpha-L-arabinofuranosidase    果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體
Apelin    脂肪炎癥因子Apelin抗體

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