ELISA試劑組成
 
    1．抗原  在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高，特異性不強；合成抗原一般為多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)表位，親和力不高，可能導(dǎo)致相應(yīng)表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強、親和力高、產(chǎn)量大等特點，是一種比較理想的抗原，但其純化比較困難。
 
    2．抗體  在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡單，但抗血清成分復(fù)雜，除含針對抗原(多個表位)的抗體外，還含有多種其他抗體，親和力和特異性相對要低于單抗，且制備周期長，批間差異較大。而單抗僅針對抗體的單一表位，親和力和特異性均較多抗高，且制備技術(shù)成熟，產(chǎn)量大，批間差異小，但結(jié)合位點的單一也正是其弱點之所在，在雙抗體夾心法中，如包被和指示抗體使用同一單抗，則由于結(jié)合位點的缺乏，容易造成假陰．性結(jié)果。在使用雙單抗一步法時，應(yīng)注意抗原過剩時的“鉤狀效應(yīng)”
 
    3．酶和底物  在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP。
    (1)HRP：是一種糖蛋白，含糖量約18％，分子量為44kD，在蔬菜作物辣根中含量很高。HRP是一種復(fù)合酶，由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合形成一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為五色糖蛋白，在275nm波長處有zui高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán)，是酶的活性基團，在403nm波長處有zui高吸收峰。HRP的純度用純度值(reinhartzahl，RZ)表示，RZ＝A403nm／A275nm，即403nm的吸光度與280nm的吸光度之比，高純度HRP的RZ值應(yīng)≥3．0。HRP質(zhì)量的另一重要指標(biāo)是酶活力，以單位(unit，U)表示。用于標(biāo)記的HRP比活性應(yīng)≥250U／mg。HRP的作用底物為H202，催化下列反應(yīng)；
DH2+H202  HRP  D+2H2O
   上式中DH2為供氫體(即底物)，H2O2為受氫體。HRP對受氫體的專一性很高，除H2O2外，僅作用于小分子醇和尿素的過氧化物。HRP的底物有多種，在ELISA中常用的有：鄰苯二胺(orthophenylenediamine，OPD)，四甲基聯(lián)苯胺(3，3，5，5-tetramethyl-benzidine，TMB)和2，2，-連氮基-雙-3-乙基苯噻唑啉磺酸鹽[2，2，-azino-bisc(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6)，ABTS]。三者各有優(yōu)缺點：OPD是在ELISA中應(yīng)用zui多的底物，靈敏度高，比色方便，但配成溶液后穩(wěn)定性差，且有致異變性；TMB經(jīng)酶作用后由五色變藍(lán)色，加酸終止反應(yīng)后顯黃色，目測對比鮮明，可比色定量，溶液的穩(wěn)定性也較差，但無致異變性，因此應(yīng)用日見增多；ABTS雖然靈敏度不如OPD和TMB，但空白值很低。
    (2)ALP：是一種磷酸酯的水解酶，用做示蹤酶的ALP活性應(yīng)在l 000U／mg以上。ALP常用的底物為對硝基苯磷酸鹽(PNP)，降解產(chǎn)物為黃色的對硝基酚。經(jīng)NaOH終止酶反應(yīng)后，顏色維持比較穩(wěn)定。
在ELISA中酶作用于底物后生成有色物質(zhì)、熒光物質(zhì)或?qū)е禄瘜W(xué)發(fā)光，分別可用分光光度計、熒光光度計測量及照度計測量。熒光和化學(xué)發(fā)光測定的敏感度均高于比色測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍亦較比色反應(yīng)寬，測定效果優(yōu)于常用的比色ELISA。
 
    4．固相載體  固相載體是ELISA中用以分離結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的主要手段，應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。
 
    5．包被  將免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學(xué)交聯(lián)法及親和素-生物素間接包被法，特別是后一方法，效率高，而且可用以包被不易吸附在固相上的各種免疫活性物質(zhì)。具體做法是先將鏈霉親和素包被在固相載體上，然后使與生物素化的抗原或抗體與之結(jié)合。由于親和素與生物素之間的高親和力，抗原或抗體即間接結(jié)合在親和素包被的固相上。
兔溶菌酶(LZM)免疫組化試劑盒     Human peptidylprolyl isomerase(cyclophilin)-like 1,PPIL1 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔熱休克蛋白90(HSP-90)免疫組化試劑盒    Human mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase 3,MAPKAPK3 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔熱休克蛋白70(HSP-70)免疫組化試劑盒    Human Angiotensin Ⅰ Converting Enzyme,ACEⅠ 免疫組化試劑盒     96T/48T
兔熱休克蛋白40(HSP-40)免疫組化試劑盒    Human Aprotinin,AP 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔熱休克蛋白20(HSP-20)免疫組化試劑盒    Human Caspase 12,Casp-12 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔去甲腎上腺素(NA)免疫組化試劑盒    Human Protein kinase A,PKA 免疫組化試劑盒     96T/48T
兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)免疫組化試劑盒    Human A Disintegrin And Metalloprotease 10,ADAM10 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)免疫組化試劑盒     Human matrix metalloproteinase 11,MMP11 免疫組化試劑盒     96T/48T
兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)免疫組化試劑盒    Human thymidylate synthetase,TS 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)免疫組化試劑盒     Human thymidinephosphorylase,TP 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫組化試劑盒    Human Poly ADP ribose polymerase,PARP 免疫組化試劑盒     96T/48T
兔粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)免疫組化試劑盒    Human glucokinase,GCK 免疫組化試劑盒    96T/48T
兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)免疫組化試劑盒     Human monoamine oxidase,MAO 免疫組化試劑盒    96T/48T