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技術(shù)文章

ELISA試劑原位雜交防止污染

閱讀:173          發(fā)布時(shí)間:2016-7-13

 ELISA試劑盒防止污染:
由于在手指皮膚及實(shí)驗(yàn)室用玻璃器皿上均可能含有RNA酶,為防止其污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在整個(gè)雜交前處理過(guò)程中都需要戴消毒手套,實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿及鑷子都應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前一日置高溫烘烤(180℃)以達(dá)到消除RNA酶的目的。雜交前及雜交時(shí)所用的溶液均需經(jīng)高壓消毒處理。
雙鏈DNA探針和靶DNA的變性:
雜交反應(yīng)進(jìn)行時(shí),探針和靶核酸都必須是單鏈的。如果用雙鏈DNA探針進(jìn)行雜交(包括檢測(cè)RNA時(shí)),雙鏈DNA探針在雜交前必須進(jìn)行變性。探針變性后要立即進(jìn)行雜交反應(yīng),不然解鏈的探針又會(huì)重新復(fù)性。
雜交液:
ELISA試劑盒雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血清白蛋白及載體DNA或RNA等。
雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低,雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的雜交溫度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。所以,雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過(guò)高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的(尤其對(duì)雙鏈核酸探針)。在雜交液中加入牛血清白蛋白及載體DNA或RNA等,都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合,以減低背景。
ELISA試劑盒探針的濃度:
探針濃度依其種類和實(shí)驗(yàn)要求略有不同,一般為0.5-5.0μg/ml(0.5-5.0ng/μl)。zui適宜的探針濃度要通過(guò)實(shí)驗(yàn)才能確定。
探針的長(zhǎng)度:
一般應(yīng)在50-300個(gè)堿基之間,zui長(zhǎng)不宜超過(guò)400個(gè)堿基。探針短易進(jìn)入細(xì)胞,雜交率高,雜交時(shí)間短。

GANC    α-葡萄糖苷酶C抗體                
GHRHR    生長(zhǎng)激素釋放因子受體抗體                
GAPDHS    3-磷酸甘油醛脫氫酶抗體                
GAPex5    Rab5激活蛋白6抗體                
GAS41    NuBI蛋白結(jié)合蛋白1抗體                
GSDML    GSDML蛋白抗體                
phospho-GATA2 (Ser401)    磷酸化GATA結(jié)合蛋白2抗體                
phospho-GATA3 (Ser308)    磷酸化GATA結(jié)合蛋白3抗體                
phospho-GATA4 (Ser105)    磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體                
GATM    GATM蛋白抗體                
GARB1    γ1氨基丁酸受體GABAA Rβ1抗體                
GPATCH2    G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體                
GPX1    谷胱甘肽過(guò)氧化酶1                

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